Western Blotting com Soro: Desafios e Estratégias de Otimização

Usar soro para Western blot é possível, mas desafiador devido a:

• Proteínas de alta abundância (albumina, IgG) mascaram alvos de baixa abundância.
• Proteases, glicoproteínas, lipídios causam fundo, borrão.
• Variabilidade de lote.

Estratégias de Otimização

1. Depletar proteínas de alta abundância – Colunas comerciais (remoção de albumina/IgG).
2. Centrifugar e filtrar – Remover detritos, lipídios.
3. Diluir idealmente – Equilibrar sinal vs. fundo.
4. Bloqueio – 5% BSA ou leite desnatado; incubação mais longa.
5. Titulação de anticorpo – Otimizar concentrações primária/secundária.
6. Lavagens mais longas, buffers mais rigorosos – Reduzir ligação inespecífica.
7. Controles positivos/negativos – Proteína purificada, soro de modelo knockout.

Quando o Soro é Preferido

• Detecção de autoanticorpos (soro do paciente como anticorpo primário).
• Estudar interações proteína-proteína em contexto nativo.
• Descoberta de biomarcadores quando tecido indisponível.

Para a maioria das aplicações, proteína purificada ou lisado celular é superior. Use soro apenas quando necessário, com otimização rigorosa.