Como Preparar Solução de Glicose Oxidase para Ensaios Analíticos

Introdução

Glicose oxidase (GOD) é enzima amplamente usada em ensaios analíticos para quantificação de glicose. Popular por: baixo custo, estabilidade (seca e em solução), baixo risco. Geralmente vem em kit com reagentes para centenas de determinações. Passos para preparo da enzima (o kit dará instruções completas do ensaio).

Materiais

• Bequeres (vidrarias)
• Fosfato de potássio monobásico (KH₂PO₄)
• Água destilada / deionizada
• Placa de agitação magnética (stir plate)
• Medidor de pH
• Solução de hidróxido de potássio 1M (KOH 1M)
• Glicose oxidase (liofilizada ou solução estoque)
• Tubos de ensaio (opcional, para diluições seriadas)

Procedimento

1. 1. Preparo do Tampão Fosfato 0,1 M (pH 7,0)

   Dissolva 13,6 g (não mg — correção de unidade: 13,6 g/L para 0,1 M) de KH₂PO₄ em ~800 mL água destilada. Ajuste pH para 7,0 com KOH 1M. Complete volume para 1 L com água destilada.

2. 2. Dissolução da Enzima

   Em bequer separado, dissolva 10 mg de glicose oxidase por 1 mL de água destilada. Misture com agitação suave (redemoinho/inversão) para evitar formação de espuma (desnaturação).

3. 3. Preparo das Concentrações de Trabalho

   Aliquote a solução estoque de enzima no tampão fosfato 0,1 M pH 7,0 em bequeres ou tubos nas concentrações necessárias para seu ensaio. Calcule concentrações baseadas nos níveis de detecção desejados e no número de pontos para curva de calibração (regressão linear).

Notas Técnicas: Armazene solução estoque a 2-8°C (use em poucos dias) ou alíquotas a -20°C (longo prazo). Evite ciclos congelamento/descongelamento. Verifique atividade enzimática periodicamente.