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Função do Corante de Rastreamento (Tracking Dye) na Eletroforese em Gel

A eletroforese em gel separa fragmentos de DNA conforme tamanho. Adiciona-se corante de rastreamento a cada amostra para visualizá-la e acompanhar o progresso dos fragmentos pelo gel.

Significado

Para separar fragmentos de DNA — medir tamanho ou isolar fragmento específico — cientistas colocam DNA em gel de agarose submerso em solução com corrente elétrica. A corrente empurra fragmentos pelo gel; como é poroso, fragmentos menores passam mais rápido. Percorrem distância maior que fragmentos maiores no mesmo tempo.

Propósito

DNA é incolor em solução no tubo de ensaio. Para facilitar visualização, tanto no tubo quanto no gel, adiciona-se corante colorido à amostra. O corante não afeta o DNA.

Rastreamento

O corante usual é azul de bromofenol em solução de glicerol a 50%. Colore a amostra de azul brilhante para fácil rastreamento. Quando o corante percorre cerca de 3/4 do comprimento do gel, é hora de desligar a corrente.

Densidade

O corante é denso devido à alta concentração de glicerol. Isso faz as amostras de DNA afundarem nos poços de carregamento do gel, em vez de flutuarem na solução acima que conduz a corrente.

Migração do Corante

Azul de bromofenol migra em solução de agarose na mesma taxa de fita de DNA com ~300 pares de bases. Para rastrear fitas maiores, usa-se corante com cianol xileno, que migra na taxa de fita com ~4.000 pares de bases.