PBMC Protocolo

células mononucleares do sangue periférico criopreservadas ( PBMC ) são uma fonte freqüente de amostras para a pesquisa , que inclui immunotherapies e respostas a vacinas. Enquanto alguns protocolos estão limitados ao isolamento e à congelação as fases do processo , os outros incluem os procedimentos de descongelamento . Procedimento de Isolamento e Procedimento de congelação

Um composto comercial para promover a separação é colocado em cada tubo de centrífuga de 50 mL e os tubos são centrifugados durante trinta segundos. Caps de tubos de sangue são pulverizados com álcool antes da abertura, em seguida, todo sangue tratado com anticoagulante é então transferido através de uma pipeta para os tubos de centrífuga . A camada de plasma do sangue é aspirado com uma pipeta .
Congelamento

As células a partir do passo anterior irá então ser centrifugado com solução salina tamponada três vezes . Após uma contagem de células , as amostras serão centrifugadas então suspensa em meio de congelação . As amostras em meio de congelamento são próxima dividido entre criotubos em uma quantidade mL. Os frascos são armazenados durante a noite em um

-70 º C congelador e mudou-se para o armazenamento a longo prazo em nitrogênio líquido no dia seguinte.
Seguro descongelamento

Criotubos são transferidas a partir de azoto líquido para um banho de água a 37 C ° e amostra é deixada descongelar um a dois minutos . A mídia transporte quente é adicionado a cada frasco. Suspensão diluída de células é centrifugada durante sete minutos. O número ea viabilidade celular são verificados , se as células precisam de concentração, as amostras são centrifugadas mais sete minutos. A amostra é diluída em solução de trabalho e descansou por doze a dezoito horas antes de iniciar o exame no protocolo especificado.