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Protocolo PBMC (Células Mononucleares do Sangue Periférico)

Isolamento e Congelamento de PBMC Criopreservadas

Células mononucleares do sangue periférico (PBMC) criopreservadas são fonte frequente de espécimes para pesquisa incluindo imunoterapias e respostas a vacinas. Alguns protocolos limitam-se a isolamento e congelamento; outros incluem procedimentos de descongelamento.

Procedimento de Isolamento e Congelamento

Composto comercial para promover separação colocado em cada tubo de centrífuga de 50 mL; tubos centrifugados por 30 segundos. Tampas de tubos de sangue pulverizadas com álcool antes de abrir; sangue total tratado com anticoagulante transferido via pipeta para tubos de centrífuga. Camada de plasma do sangue aspirada com pipeta.

Congelamento

Células da etapa anterior centrifugadas com salina tamponada três vezes. Após contagem celular, espécimes centrifugados e suspensos em meio de congelamento. Espécimes em meio de congelamento divididos entre criovials em volumes de 1 mL. Frascos armazenados overnight em freezer a -70°C e movidos para armazenamento de longo prazo em nitrogênio líquido no dia seguinte.

Descongelamento Seguro

Criovials transferidos do nitrogênio líquido para banho-maria a 37°C; espécime descongela 1-2 minutos. Meio de transporte morno adicionado a cada frasco. Suspensão celular diluída centrifugada por 7 minutos. Número e viabilidade celular verificados. Se células precisam concentrar, centrifugar 7 minutos mais. Amostra diluída para solução de trabalho e repousada 12-18 horas antes de iniciar exame no protocolo especificado.