Como medir catalase Concentrações

catalase é um catalisador biológico ( orgânico ) . Esta enzima é um dos catalisadores mais potentes conhecidos e tem efeitos benéficos sobre o corpo humano e é essencial para a vida . Catalase atua como um catalisador para acelerar a decomposição do peróxido de hidrogênio . O peróxido de hidrogénio é um subproduto metabólico que é tóxico para as células , se não for removido . Catalase auxilia na quebra de peróxido de hidrogênio em água e oxigênio . Catalase também ajuda na oxidação outras toxinas, tais como fenóis, ácido fórmico , formaldeído e álcool . Coisas que você precisa
Two 110 mL de cromógeno em tampão fosfato
300 mL de substrato - 30 % de peróxido de hidrogênio
400 μL.HRP - peroxidase em tampão fosfato
60 mL de fosfato tampão
250 mL da amostra surfactante diluente em tampão fosfato
tampão fosfato diluente Two 30 mL de substrato
reagente parada Two 30 mL - azida de sódio
Dois frascos de 160 U /frasco padrão catalase
espectrofotômetro
10 ml pipetas ajustáveis
1 centímetro de comprimento caminho tinas espectrofotométricos
microtubos de 1,5 mL de polipropileno com tampa
tubos de ensaio - milímetro 12x75 (2,5 ml cada)
Temporizador
água deionizada

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Prepare o estoque de catalase que você estará medindo adicionando 200 microlitro ( L) de água deionizada para as concentrações de catalase em 50 mililitros (ml) frascos . O nível de concentração catalese deve ser de 160 unidades por mililitro ( U /ml ) .
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Adicionar 30 mL de catalase diluída em tubos . Adicionar 500 uL de substrato ( peróxido de hidrogénio - 10mm de H2O2 ) em cada tubo . Tenha cuidado para não espirrar o peróxido de hidrogênio quando se trabalha com ele.
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Incubar cada tubo indivíduo durante um minuto à temperatura ambiente.
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Adicione 500 & mu ; L de reagente a cada frasco . Tampe cada frasco e misturar invertendo o frasco para cima e para baixo. Não agite a mistura , agite o frasco ou mexa com um objeto.
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Adicione 20 mL de cada mistura de reação em tubos de ensaio. Adicione 2 ml de reagente HRP em cada tubo de ensaio . Novamente , misturar a solução por inversão dos tubos de ensaio várias vezes .
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Incubar a solução de novo , desta vez durante 10 minutos à temperatura ambiente .
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Leia a absorvância nível da solução com um espectrofotómetro . As medidas de espectrofotometria luz comprimentos de onda para determinar exatamente quais substâncias estão presentes e que e concentrações . Este método irá proporcionar uma leitura precisa da concentração de catalase . A informação é útil no contexto da interação de catalase com peróxido de hidrogênio , como neste experimento , e como ocorre naturalmente no corpo humano.