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Princípios da Citometria de Fluxo: Processo, Câmara de Fluxo, Fonte de Luz, Imunologia e Análise de ADN

A citometria de fluxo combina biologia celular com estudo de ondas de luz. Quando feixe de luz incide numa partícula, a luz dispersa-se em duas direções. Os ângulos da luz dispersa são medidos, criando imagem de objetos entre 0,5 µm a 40 µm de diâmetro. Métricas de citometria de fluxo medem várias propriedades de células biológicas: tamanho, granularidade, recetores celulares e atividades biológicas (replicação e síntese de ADN e ARN).

Processo

Técnicas começam com biópsia de células passadas uma a uma através de feixe de luz num citómetro. À medida que passam, a luz dispersa-se e medem-se ângulos de refração. Realizado em conjunto com microscópio fluorescente, usado para avaliar componentes celulares através de emissões de corantes fluorescentes.

Câmara de Fluxo

Função: funil para garantir entrega de células em fila única ao feixe de luz. Preenchida com fluido de bainha (sheath fluid), empurrado com células suspensas. Largura típica do funil: 10 micrómetros. Fluido empurrado para lente coletora que dispersa a luz.

Fonte de Luz

Maioria dos laboratórios usa laser; outras fontes: lâmpada de arco ou LED. Lâmpada de arco não deteta fluorescência fraca, mas usa-se com tecnologia de emissores fortes (ex.: análise de ADN). Principalmente: laser de argão emitindo luz azul a 488 nm.

Imunologia

Usada para medir condições em imunologia e infeção. Diagnóstico de VIH (formas hereditária e adquirida). Medição de proliferação de glóbulos brancos em linfomas e carcinomas. Avaliação de resultados de transplantados de medula óssea.

Análise de ADN

Mede quantidade de ADN no núcleo celular. Identifica fase específica do ciclo celular. Deteta número anormal de cromossomas para identificar doenças genéticas. Também usada para detetar esófago de Barrett.