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Protocolos CFU (Unidades Formadoras de Colônia) em microbiologia

O que é CFU

Unidade Formadora de Colônia (CFU) é uma medida de números de microrganismos. Diferente de outros métodos, como contagem microscópica direta onde microrganismos mortos e vivos são considerados, protocolos CFU permitem biólogos contarem apenas células viáveis. Unidades de medida padrão são unidades formadoras de colônia por mililitro para líquidos e por grama para sólidos. Protocolos CFU são amplamente usados em pesquisa biotecnológica.

Principais protocolos

Ensaio CFU-MK para Trombocitopenia Aguda

Megacariócito (MK) é tipo de célula de medula óssea que produz plaquetas. Este protocolo é usado em estudos sobre trombocitopenia, condição relacionada a baixos números de plaquetas. Antes da contagem, técnicos preparam o ensaio CFU-MK com células de sangue de cordão humano, meio Iscove modificado de Dulbecco, solução de colágeno bovino, meio livre de soro com proteínas chamadas citocinas, anticorpos anti-TNP, anti-GPIIb/IIIa e anti-IgG de camundongo, contra-corante azul de Evans, tampão Tris/NaCl e albumina sérica bovina.

Protocolo de Mistura para Ensaio de Colônia

Técnicos preparam este ensaio com plasma humano, químico 2-mercaptoetanol, meio condicionado por leucócitos, hormônio eritropoietina e meio Iscove modificado de Dulbecco, segundo Jeffrey W. Pollard em "Basic Cell Culture Protocols". Esta solução é então misturada com amostras de células a serem analisadas. Metilcelulose é adicionada, e as amostras são incubadas em atmosfera umidificada com 5% de dióxido de carbono por 14 dias.

Migração de CFU em Células CD34

CD34, ou cluster de moléculas de diferenciação, estão presentes em certas células de imunodefesa humana, atuando como fator de adesão controlado nas membranas celulares. Células contendo esta proteína podem ter capacidade de migrar de um tecido para outro. Durante este protocolo, técnicos lavam amostras de células CD34 migradas para remover proteínas citocinas. Amostras são então centrifugadas e ressuspensas em meio contendo fatores de crescimento. Colônias são contadas duas semanas depois.