A glicose é um carboidrato simples, a unidade energética fundamental para plantas e animais. Estruturalmente, é um açúcar de seis carbonos com grupo aldeído na forma linear (acíclica). Todos os alimentos ingeridos são convertidos, através de vias metabólicas, em glicose para uso ou armazenamento energético. As plantas sintetizam glicose via fotossíntese.
A solução de Benedict é azul-clara devido ao sulfato de cobre. Ao ser misturada e aquecida com um açúcar redutor como a glicose — que possui elétrons disponíveis para doação —, o íon cobre (II) aceita esses elétrons e é reduzido a íon cobre (I), mudando a cor para marrom-alaranjado. Simultaneamente, a glicose é oxidada. Por essa capacidade de reduzir o cobre, a glicose é classificada como açúcar redutor.
Além da glicose, outros açúcares com grupo aldeído livre na forma linear também são redutores, como a ribose. A sacarose, porém, é um não redutor por estar "travada" na forma cíclica, sem grupo aldeído livre. A capacidade de doação de elétrons define a classificação.
Adiciona-se volume igual de solução de Benedict à amostra em tubo de ensaio. Após mistura e aquecimento a 95 °C por alguns minutos, observa-se a mudança de cor. O teste é semi-quantitativo: a intensidade do precipitado marrom-alaranjado correlaciona-se com a concentração de açúcar redutor. Uma cor verde-esverdeada indica concentração baixa.
O uso mais comum é a detecção de glicose na urina para triagem de diabetes mellitus. Diabéticos excretam glicose por incapacidade de absorção celular. Após resultado positivo, exames quantitativos confirmam o diagnóstico e avaliam a gravidade.