casa |  | Saúde e Doença >  | Saúde Pública e Segurança | Pesquisa Médica

Técnicas de Centrifugação: Pellet, Supernatante e Isolamento por Massa/Densidade

Centrifugação separa componentes de amostras biológicas por massa/densidade via força centrífuga (g-force). Parâmetros-chave: velocidade (RPM/RCF), tempo, temperatura, tipo de rotor.

Pellet (Precipitado)

Partículas mais pesadas sedimentam no fundo do tubo formando pellet compacto. RCF determina tamanho das partículas pelletizadas: maior RCF → partículas menores sedimentam. Ex.: 1.000 × g — núcleos/células inteiras; 10.000 × g — mitocôndrias; 100.000 × g — ribossomos, vesículas, vírus.

Supernatante

Líquido acima do pellet, contendo partículas menores/solúveis. Coletado por pipetagem (evitando perturbar pellet). Pode ser recentrifugado em RCF maior para fracionamento sequencial.

Centrifugação Diferencial (Isolamento por Massa)

Sequência de centrifugações em RCF crescentes: pellet grosso removido, sobrenadado recentrifugado. Isola organelas em ordem decrescente de tamanho. Limitação: sobreposição de tamanhos contamina frações.

Centrifugação em Gradiente de Densidade (Isolamento por Densidade)

Tubo preenchido com camadas de meio de densidade crescente (ex.: sacarose, Percoll, iodixanol). Amostra no topo; centrifugação isopicnítica: partículas migram até posição onde sua densidade = densidade do meio. Resolução superior; separa organelas de tamanho similar mas densidade distinta (ex.: mitocôndrias vs. lisossomos).