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Contagem de RBC e WBC com Hematócrito: Por que a Diluição Importa e Como Fazer Corretamente

A contagem precisa de células sanguíneas usando um hematócrito requer diluição adequada—nunca use sangue concentrado. Amostras concentradas causam sobreposição de células, aglomeração e erros de contagem. Razões de diluição padrão garantem que as células estejam distribuídas uniformemente dentro da câmara de contagem.

Contagem de Glóbulos Vermelhos (RBC)

Diluição

• Diluição padrão: 1:200 (1 parte de sangue + 199 partes de diluente)
• Diluente: solução de Hayem, solução de Gower ou solução salina isotônica com fixador
• Misture bem após a diluição

Carregamento e Contagem

1. Coloque a lamínula no hematócrito (câmara de Neubauer ou Neubauer aprimorada).
2. Aplique a amostra diluída na borda da lamínula—a ação capilar preenche a câmara.
3. Aguarde as células se assentarem 1–2 minutos.
4. Sob microscópio (objetiva 10×), conte os RBCs nos 5 grandes quadrados das esquinas (cada 1 mm², subdividido em 16 quadrados pequenos).
5. Aplique regras de contagem: inclua células tocando as linhas superior/esquerda; exclua aquelas tocando as linhas inferior/direita.

Cálculo

Contagem de RBC (células/µL) = (Total de células contadas em 5 quadrados) × 10.000

Derivação: fator de diluição 200 × profundidade da câmara 0,1 mm × área 1 mm² × 5 quadrados = 10.000

Contagem de Glóbulos Brancos (WBC)

Diluição

• Diluição padrão: 1:20 (1 parte de sangue + 19 partes de diluente)
• Diluente: solução de Turk (ácido acético + violeta de genciana) lisá RBCs e cora núcleos de WBC

Carregamento e Contagem

1. Carregue a amostra diluída no hematócrito como acima.
2. Conte os WBCs nos 4 grandes quadrados das esquinas (1 mm² cada).
3. Diferencie os tipos de células se estiver realizando diferencial manual (neutrófilos, linfócitos, monócitos, eosinófilos, basófilos).

Cálculo

Contagem de WBC (células/µL) = (Total de células contadas em 4 quadrados) × 50

Derivação: fator de diluição 20 × profundidade da câmara 0,1 mm × área 1 mm² × 4 quadrados = 50

Pontos Críticos de Qualidade

• Use hematócrito e lamínula limpos e secos—sem detritos ou arranhões.
• Garanta mistura adequada antes do carregamento; evite bolhas.
• Conte pelo menos 100 células por tipo de célula para confiabilidade estatística.
• Siga as instruções do fabricante e os SOPs do laboratório.
• Analisadores automatizados substituíram em grande parte as contagens manuais, mas a hematócrito permanece como método de referência para validação.