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Protocolos de coloração com Safranina O em biologia molecular

O que é Safranina O

Safranina O é substância química usada em biologia molecular como corante. Este corante reage com cartilagem (tecido de orelhas, nariz, articulações), endósporos bacterianos, substâncias de resposta imunológica chamadas grânulos e algumas proteínas como mucinas. Protocolos de Safranina O incluem coloração de cartilagem, coloração de endósporos e côndilo descalcificado.

Principais protocolos

Protocolo de Coloração de Cartilagem

Usado para detecção de cartilagem; mucinas, tipo de proteína de alto peso produzida em tecidos cutâneos; e grânulos de mastócitos de imunodefesa, feitos de heparina e histamina. Amostras de cartilagem são tratadas com formalina e parafina, reporta IHC World. Técnicos hidratam amostras com água, coram com hematoxilina férrica de Weigert e lavam. Então coram com verde rápido e enxaguam com ácido acético. Adicionam solução 0,1% de Safranina O. Após 5 minutos, amostras são desidratadas com álcool etílico. Observação microscópica mostra núcleos em preto e citoplasma em verde-acinzentado. Cartilagem, mucina e grânulos de mastócitos são laranja a vermelho.

Protocolo de Coloração de Endósporos

Endósporos são estruturas formadas dentro de células bacterianas dormentes ou vegetativas que servem como mecanismo de sobrevivência quando organismos estão sob estresse. Segundo Sociedade Americana de Microbiologia, safranina pode ser usada em conjunto com corante verde malaquita no estudo destas células vegetativas. Sob microscópio, endósporos são verdes, enquanto células vegetativas são marrom-avermelhadas ou rosadas. Procedimentos incluem fixação por calor de lâminas, coloração com verde malaquita sob fonte de calor, lavagem com água e coloração com Safranina O em solução alcoólica.

Protocolo de Côndilo Descalcificado

Usado em estudo laboratorial de descalcificação de articulações ou côndilos. Segundo Yuehuei An em "Handbook of Histology Methods for Bone and Cartilage", Safranina O em solução aquosa é usada para colorir cartilagem e áreas sem cálcio. Técnicos coram lâminas de côndilo de coelho com Safranina O por 40 minutos, enxaguam em três trocas de água destilada e mergulham amostras em solução alcoólica de verde rápido por 30 segundos, seguido por mergulho rápido em ácido acético. Enxaguam amostras com água e desidratam com álcool etílico. Substância chamada xileno é adicionada antes de observação microscópica.