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Coloração de Ziehl-Neelsen (Álcool-Ácido): Princípios, Procedimento e Significado

Coloração Diferencial

Coloração comum: corante 1 min → enxágue. Diferencial: dois corantes no mesmo esfregaço. Ex.: Gram → violeta de cristal + iodo → descoloração com álcool. Gram+ retêm roxo; Gram- ficam incolores → contracorante rosa (fucsina) pinta Gram-.

História

Algumas bactérias têm parede cerosa (lipídios) → impermeável a corantes comuns. Anos 1880: Mycobacterium tuberculosis não corava com Gram (exceto imersão 24 h). Paul Ehrlich desenvolveu coloração álcool-ácido (45 min); técnica moderna: 5 min.

Método

Forçar corante (geralmente fucsina carbólica) com calor: aqueça lâmina sobre água fervente 5 min, mantendo úmida. Alternativa: fucsina carbólica de Kinyoun modificada (sem calor, imersão 5 min, não secar). Descoloração com álcool-ácido (não álcool comum) → contracorante de cor contrastante. Bactérias que retêm corante primário = álcool-ácido resistentes (BAAR).

Precaução com Organismo

M. tuberculosis = alto risco. Só em laboratórios com nível de biossegurança adequado (salas separadas, cabines de fluxo). Proibido em laboratórios acadêmicos. Usa-se M. smegmatis (parede mais fina → risco de superdescoloração).

Precaução Procedimental

Fumos de fucsina carbólica = tóxicos. Use capela de exaustão ao aquecer. Para evitar aquecimento, use Kinyoun (maior concentração de fenol/fucsina) que penetra sem calor.