Como Preparar uma Amostra para Eletroforese em Gel

Separação eletroforética é um dos métodos mais amplamente usados em bioquímica. Embora a eletroforese possa ser realizada livremente em solução, é mais conveniente usar algum tipo de meio de suporte. Os dois meios de suporte mais comumente usados são papel e gel. Eletroforese em gel é uma técnica muito usada com proteínas e ácidos nucleicos. Análise de DNA é um caso significativo onde eletroforese em gel é realizada. DNA são polieletrólitos que podem ser separados baseados apenas no tamanho.

O que Você Vai Precisar

• Solução da amostra
• Solução padrão
• Solução tampão
• Meio de gel
• Corante de rastreamento

Instruções

1. Prepare a solução da amostra e a solução padrão de peso molecular conhecido.

2. Prepare uma solução tampão com o valor de pH mais próximo da sua amostra.

3. Prepare o meio de suporte (gel); materiais comuns formadores de gel são poliacrilamida, um polímero reticulado solúvel em água, agarose e polissacarídeo.

4. Coloque o gel entre compartimentos de eletrodos, com o fundo selecionado como ânodo ou cátodo, dependendo se ânions ou cátions estão sendo separados.

5. Com uma pipeta, cuidadosamente coloque uma pequena quantidade de solução de cada amostra em um dos vários entalhes pré-moldados no topo do gel.

6. Adicione glicerol e um corante de rastreamento solúvel em água à amostra. O glicerol torna a solução da amostra densa, para que não se misture à solução tampão na câmara do eletrodo superior.