Como testar a concentração de enzimas amilase

enzimas amilase são produzidas no pâncreas e nas glândulas salivares e ajudar a digerir os carboidratos e de processo. Quando o pâncreas se torna doente , amilase é liberado na corrente sanguínea. Quando um paciente está com problemas do trato digestivo ou há doença do pâncreas, o médico vai pedir um exame de sangue para determinar o nível de amilase no sangue. A monitorização dos níveis de enzima amilase irão proporcionar muita informação sobre a progressão da doença e os efeitos do tratamento . Coisas que você precisa
UV /VIS
15 grandes tubos de ensaio
suporte para tubos de ensaio
1 mg /ml solução de amido
água deionizada
KI /iodo reagente
Pipettes
Dropper
Tissue
Cuvettes
papel gráfico
amostra de sangue
Centrífuga
Cronômetro
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Preparação de um Amido padrão Curva
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Ligue o espectrofotômetro e configurá-lo para um comprimento de onda de 620 nm. Deixe o instrumento aquecer por um mínimo de 10 minutos para que a resposta será estável durante o experimento.
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Estabelecidos seis tubos de ensaio , classificá-los 1-6 e colocá-los em um teste suporte de tubos . Organize as soluções de amido, água deionizada e solução de KI /iodo na bancada
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Encha o tubo 1, com 3 ml de água deionizada usando uma pipeta. ; isso vai servir como o branco. Encher tubos 2-6 com 3,0 ml, 2,9 ml , 2,7 ml , 2,4 ml e 2,1 ml de água desionizada , respectivamente . Adicionar uma solução de amido para cada um dos tubos de 2-6 , pela seguinte ordem : o tubo 2 fica 0 ml , tubo 3 recebe 0,1 ml , tubo 4 recebe 0,3 ml , tubo 5 recebe 0,6 ml e 6 de tubo recebe 0,9 ml
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Adicionar uma gota de solução de KI /iodo para cada um dos seis tubos . Misturar cuidadosamente cada tubo completamente antes de gravar seu absorbância no espectrofotômetro .
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Encha a tina com a solução em branco, limpar a parte externa da tina e colocá-lo no buraco branco do espectrofotômetro . Ajusta -se a absorvância a zero . Todas as outras soluções trará uma absorção positiva.
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Encha a cuvete de amostra com cada uma das outras cinco soluções , por sua vez . Passe o exterior da tina antes de cada medição . Anote o valor de absorbância para cada tubo. Lave a cuba com a nova solução , pelo menos uma vez antes do enchimento para o teste.
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Faça um gráfico que traça as leituras de absorbância contra concentração de amido . Esta é a curva padrão que permite determinar a concentração de uma solução que tem uma determinada leitura de absorbância.
Determinar Amylase Concentração
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Limpe todos os tubos de ensaio de na primeira parte do ensaio . Manter o tubo em branco para uso posterior.
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Obter uma amostra de sangue do paciente. Colocar a amostra numa centrífuga e separar as células vermelhas do sangue a partir do plasma sanguíneo .
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Encher um tubo de ensaio com 9 mL de água desionizada e 1 ml de plasma sanguíneo . Esta é uma diluição de plasma de 1:10. Misturar completamente o tubo com uma pipeta, 1 ml da solução para um segundo tubo de ensaio . Identifique os dois tubos com seus conteúdos.
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Prepare-se para realizar um teste cronometrado. Tenha um cronômetro à mão e criou sete tubos de ensaio com células no rack tubo de ensaio. Você vai fazer leituras a cada dois minutos uma vez que o teste começa . Registre o tempo exato e leitura de absorbância para cada um dos sete pontos de dados. Encher cada um dos sete tubos de ensaio com 2 ml de água desionizada .
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Adicionar 9 ml da solução de amido para o tubo de ensaio que tem a 1 ml de diluição 1:10 de plasma . Assim que você começar a adicionar a solução de amido , iniciar o cronômetro. Misturar bem no tubo de ensaio com uma pipeta, 1 ml da solução de amido /plasma para o primeiro dos sete tubos de ensaio . Anote o tempo . Adicione 1 gota de solução de KI /iodo para o tubo de ensaio e misturar.
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Transferência para a tina , limpe o exterior e registrar a absorbância. Repita o processo com os restantes seis tubos de ensaio com intervalos de dois minutos. Na conclusão do teste cronometrado você deve ter leituras para o tempo real e de absorção para os intervalos de tempo de 0, 2, 4, 6, 8, 10 e 12 minutos.
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Use o padrão curva para obter a concentração de amido para cada um dos sete pontos de dados . Estes aspectos serão diminuir com o tempo . A amilase digere o amido e ao longo do tempo consome todo o amido disponível.
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Graph os pontos de dados para o teste cronometrado como concentração de amido em função do tempo . A inclinação da curva indica a quantidade de amilase na amostra de plasma .