Protocolos de Purificação de TPA

activador de plasminogénio tissular ou TPA é um tipo de serina-protease , o qual é uma proteína capaz de destruir a formação de coágulos sanguíneos . TPA é encontrada nas células que cobrem internamente os vasos sanguíneos . Protocolos TPA fazem parte da investigação farmacêutica e médica sobre cursos , bem como doenças cardíacas e pulmonares , tais como embolia pulmonar e infarto do miocárdio. TPA refere-se a purificação para o isolamento dessa proteína de outras moléculas através de uma série de processos , incluindo cromatografia e electroforese . A purificação do tPA a partir do rim do porco

Este protocolo é utilizado em estudos de fibrinólise , o processo de quebra do produto de coagulação chamada fibrina , relacionado com a formação de tumores . Técnicos extrair TPA de seco - acetona rim do porco com tampão acetato de potássio , pH 4,2 . Em seguida , adicionar sulfato de amónio que para induzir a precipitação de células . Acrescentam - n-butil- sefarose para as amostras, as quais são então analisados num cromatógrafo . Concanavalina A também é adicionado e chromatograph.y para separar as proteínas diferentes é realizada.
Purificação da TPA de ovário de hamster chinês e células de E. coli

pureza proteína é um fator importante para o sucesso de experimentos biológicos . Purificada TPA também está disponível comercialmente , economizando tempo e evitando o risco de comprometer o experimento devido a solução purificada mal . Este protocolo envolve os processos de purificação de TPA no mamífero e células bacterianas . Técnicos precipitar amostras celulares , filtra -los e efectuar a análise por cromatografia de afinidade e gel . Mais tarde, eles analisar e comparar os resultados , antes da produção comercial.
Expressão da TPA humanos activos na E. coli

lisados celulares clarificados são adicionados ao uma lisina - Sepharose , analisados num cromatógrafo e lavou-se com uma solução de cloro de sódio . Outro exemplo é carregado numa segunda coluna de cromatografia contendo proteínas que se liga a TPA com uma afinidade muito elevada . Uma amostra da segunda coluna é misturada com uma solução de zinco - Sepharose . A proteína resultante mostra que mais de 90 por cento de pureza , de acordo com a revista " Applied and Environmental Microbiology . "