Diferença entre directo e indirecto ELISA

Um ensaio imunoabsorvente ligado a enzima ( ELISA ) envolve a reacção de um complexo anticorpo - enzima com um antigénio ou anticorpo mantido imóvel sobre uma superfície sólida . Na incubação da enzima conjugada com um substrato adequado , um produto é formado . A formação de um produto ajuda a detectar a presença de antigénios ou anticorpos e a sua quantidade , dá uma medida da quantidade de reacção antigénio - anticorpo que ocorreu . O teste de ELISA pode ser realizada de duas formas : direta e indireta. Formato Teste

No teste ELISA direto , um anticorpo primário é realizada nas paredes de uma placa de microtitulação . Quando a amostra suspeita de conter o antigénio é adicionado , existe uma reacção antigénio - anticorpo . Em seguida , um anticorpo secundário ligado a enzima que é capaz de reagir com o antigénio é adicionado . Se o antigénio estiver presente na amostra , liga-se a este anticorpo ligado a enzima . Quando um substrato incolor é adicionado , se desenvolve uma cor , isto indica a presença do antigénio . No ELISA indireto, antígeno é realizada nas paredes da microplaca . Quando uma amostra suspeita de conter anticorpos é adicionado , ocorre uma reacção antigénio - anticorpo . Em seguida , um anticorpo secundário ligado a enzima capaz de reagir com a região não ligada do anticorpo é adicionado . Quando o substrato incolor é adicionado, ele leva ao desenvolvimento de cor, se a amostra utilizada contém anticorpos .
Facilidade de Teste

Uma ampla gama de anticorpos secundários marcados são comercialmente disponível . Além disso, é possível criar vários anticorpos primários em uma dada espécie e usar o mesmo anticorpo secundário de detecção . Isso faz com que o ensaio ELISA indirecto fácil de executar . No ELISA directo , os anticorpos primários, têm de ser especificamente preparado para reagir com o antigénio específico da suspeita de estar presente na amostra . Isso faz com que o ELISA direto desvantajoso em relação à prova indireta.
Rapidez do Teste

O teste ELISA direto é rápido em comparação com o teste indireto , pois utiliza apenas um único anticorpo . O ELISA indireto requer uma etapa adicional de incubação com um segundo anticorpo durante o ensaio , o que provoca um atraso na obtenção de resultados .
Sensibilidade

O teste ELISA direto é menos sensível do que a forma indirecta do ensaio , porque há muito menos a amplificação do sinal . Além disso, a rotulagem do anticorpo primário com uma enzima pode prejudicar o seu perfil immonoreactivity . No caso de o ensaio ELISA indirecto , o anticorpo primário não está marcado e, por isso , mantém a sua imunorreactividade . Além disso , cada anticorpo primário tem muitos epitopos que podem ligar-se com o anticorpo secundário , o que permite a amplificação do sinal , melhorar a sensibilidade do método . No entanto , existe a possibilidade de reactividade cruzada entre o antigénio e o anticorpo secundário , o que leva a um erro nos resultados . Não existe essa possibilidade no método ELISA direto .