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Métodos de teste de sensibilidade a antifúngicos (fungicidas)

Objetivo

Determinar a concentração inibitória mínima (CIM) de um antifúngico contra uma cepa fúngica isolada, guiando terapia direcionada e detectando resistência.

Principais métodos padronizados (CLSI M27/M38, EUCAST)

1. Microdiluição em caldo (Broth Microdilution) – Padrão-ouro

• Placas de 96 poços com meio RPMI-1640 (CLSI) ou RPMI/MOPS (EUCAST).
• Inóculo padronizado (0,5 McFarland → 1-5×10³ UFC/mL).
• Diluições seriadas do antifúngico (2 dobras).
• Incubação 35°C, 24-48h (leveduras) ou 48-72h (filamentosos).
• Leitura visual ou espectrofotométrica (OD 530 nm).
• CIM = menor concentração com inibição ≥50% (azóis, equinocandinas) ou ≥80% (anfotericina B).

2. Teste de difusão em disco (Disk Diffusion)

• Ágar Mueller-Hinton + glicose 2% + azul de metileno (CLSI M44) ou RPMI (EUCAST).
• Discos com concentrações fixas (ex.: fluconazol 25 µg, voriconazol 1 µg, caspofungina 5 µg).
• Inóculo em lawn, incubação 35°C 24h.
• Medir halos de inibição (mm). Tabelas de breakpoints interpretam S/I/R.
• Vantagem: simples, baixo custo, boa para Candida spp. e fluconazol.
• Limitação: não confiável para anfotericina B, equinocandinas, alguns bolores.

3. E-test (Gradient Diffusion / AB Biodisk)

• Tira com gradiente contínuo de concentração + escala de CIM.
• Mesmo ágar do disco-difusão.
• Leitura direta da CIM na interseção elipse/escala.
• Versátil (leveduras, bolores), bom para antifúngicos sem disco comercial.
• Custo mais alto.

4. Sensititre / Painéis automatizados (ex.: VITEK 2 AST-YS, Sensititre YeastOne)

• Microdiluição automatizada/pronta.
• Rápido, reprodutível, rastreabilidade.
• Limitado ao painel de drogas do cartão.

Interpretação e qualidade

• Usar cepas de controle de qualidade (ATCC C. albicans 90028, C. parapsilosis 22019, C. krusei 6258).
• Breakpoints específicos por espécie/fármaco (CLSI M27-S4, M38-S3; EUCAST 2024).
• Resistência intrínseca conhecida (ex.: C. krusei resistente a fluconazol; C. glabrata dose-dependente).

Aplicações clínicas

• Infecções invasivas (candidemia, aspergilose invasiva).
• Falha terapêutica.
• Vigilância epidemiológica de resistência.

Resultado deve ser correlacionado com sítio de infecção, farmacocinética e estado imunológico do hospedeiro.