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Protocolos de Blot: Southern, Northern, Western e Southwestern

Dot blot (ou slot blot): técnica de biologia molecular para detetar biomoléculas aplicando mistura diretamente numa membrana como ponto. Sondas de nucleótidos ou anticorpos detetam as biomoléculas. Confirma presença/ausência, mas não dá informação sobre tamanho → outros testes necessários.

Southern Blot

Deteta sequência específica de DNA. Combina transferência de fragmentos de DNA quimicamente separados para membrana filtrante com deteção por hibridização de sonda. Determina número de sequências/cópias génicas num genoma. Desenvolvido por Edwin Southern (biólogo britânico) em 1975.

Northern Blot

Estuda expressão génica detetando RNA numa amostra. Permite observar controlo da célula sobre estrutura/função. Determina expressão génica particular em estádios de desenvolvimento e condições anómalas/doença. Separa amostras RNA por tamanho; deteta parte da sequência alvo. Desenvolvido por equipa de Stanford em 1977.

Western Blot

(Imunoblot de proteínas) Deteta proteínas específicas em amostra de tecido. Usa eletroforese em gel: separa proteínas nativas/desnaturadas por comprimento polipeptídico ou estrutura. Após transferência para membrana, anticorpos específicos detetam proteína-alvo. Usado no diagnóstico de VIH, doença da vaca louca, algumas formas de Lyme, hepatite B, SIDA felina.

Southwestern Blotting

Identifica e caracteriza proteínas de ligação a DNA pela capacidade de ligar a sondas específicas. Processo: eletroforese em gel → transferência para membranas celulares específicas. Combina protocolos Southern + Western.