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Protocolo do Ensaio de Ellman: Monitoramento de Colinesterase e Exposição a Pesticidas

Ensaio de Ellman permite monitorar inibição da colinesterase sanguínea, molécula que inicia quebra de hormônios como acetilcolina. Consequentemente, permite identificação da exposição de pessoa a certos pesticidas.

Vantagens

Quando usado com medição de excreção de metabólitos urinários, método do reagente de Ellman fornece forma rápida e fácil de provar se sujeito foi ou não exposto a pesticidas organofosforados.

Uma única gota de sangue é suficiente. Não requer centrífuga de éter grande. Exige apenas instrumento capaz de detectar ondas de luz.

Método

Cubra poço de placa de microtitulação com mistura crucial do ensaio, contendo acetiltiocolina (AChE). Após cada poço coberto, coloque microquantidade de sangue de um sujeito em cada poço. Complete, adicione substância que identifica proteína de interesse e se liga a ela.

Reagente adicionado antes da medição das ondas de luz emitidas deve emitir comprimento de 405 nm. Equipamento de laboratório mede quantidade de luz absorvida nesse comprimento de onda.

Precauções

Reagente cromogênico (colorante) usado durante teste mostrou alterar comprimento das ondas emitidas quando exposto a temperaturas altas. Portanto, mantenha refrigerado.