Plaque Assay Method

Um ensaio é uma técnica utilizada para isolar e purificar vírus e para determinar os títulos virais ( a menor concentração de vírus que resulta em infecção ) . Um ensaio de placa , originalmente chamado de um ensaio virológica , foi desenvolvido para medir e contar a infectividade de bacteriófagos . De acordo com a Biologia - Online.org , que mais tarde foi também aplicada a contar vírus de mamíferos . Os fatos

A placa é um confluente , cultura em monocamada de células. Ele forma como um resultado da infecção de uma das células de uma única partícula de vírus , de acordo com a biologia - Online.org . Uma vez que a célula é infectada , o vírus se replica e eventualmente mata a célula . Além disso, as partículas do vírus recém- replicados se espalhar e infectar e matar as células vizinhas.
Função

Em um ensaio de placa , a cultura é primeiro marcadas com um corante especial . Esta die manchas células só viáveis ( vivos) , de acordo com Biologia - Online.org . Como resultado , as células mortas não coradas aparecem na cultura , contra o fundo tingido . Atualmente, o ensaio de placa é aplicada para detectar células que produzem anticorpos que destroem as hemácias por hemólise.

Características

eritrócitos são células (também chamadas de células vermelhas do sangue ) que contêm uma hemoglobina e de transporte de oxigénio e dióxido de carbono no sangue , a partir de pulmões e tecidos . A hemólise ocorre quando hemácias quebrar e liberar a hemoglobina, de acordo com a Biologia - Online.org . Como resultado , no ensaio de placa , a placa base é clara e indica que as células vermelhas do sangue foram hemolisadas pelos anticorpos .
Método Parte I

Dez diluições de um estoque de vírus são preparadas antes de realizar um ensaio de placa e aliquiots 0,1 ml são colocados para as monocamadas celulares. Esta mistura é incubada durante um período de tempo de modo a que o vírus não tem tempo para atacar as células . Além disso , as monocamadas são cobertos por um meio nutriente que contém uma substância ( usualmente de agar ) , de acordo com a " detecção de vírus : Uma placa de ensaio " por Vincent Racaniello . O meio nutriente forma um gel e depois a cultura foi incubada , as células originais infectadas libertar descendência virai . O gel de restringir a propagação do vírus a células vizinhas , e como resultado , a partícula infecciosa produz uma zona circular chamado uma placa . Com o tempo , a placa cresce até um tamanho visível a olho nu e os corantes são usados para melhorar a visualização .
Método Parte II

O título do vírus é calculado unidades formadoras de placas , chamadas UFP , por mililitro . Eles são contadas e , ao erro minimizado , apenas as placas que contêm entre 10 e 100 placas são contadas . Além disso, de acordo com a " detecção de vírus : A placa do ensaio ", para cada 100 placas contados a mesma titulação irá variar em mais ou menos 10 por cento. Portanto, o erro estimado de um ensaio de placa é de cerca de 10 por cento, quando realizada corretamente .