A congelação de células protocolo

Preservar as células por meio de congelação é essencial para a pesquisa , a medicina veterinária e criação de animais , pois permite que as células a ser armazenado por longos períodos de tempo . O método de congelação seleccionado , no entanto , tem de reduzir ou evitar danos para a célula . O agente de criopreservação e método pode depender do tipo de célula . Preparação

As células devem ser congelados quando eles são saudáveis e crescendo ativamente com uma viabilidade de 90 por cento . Cuidados devem ser tomados no manuseio e centrifugação de alta velocidade e pipetagem vigorosa ou aspiração deve ser evitado para manter a viabilidade e evitar danos celulares.
Crioproteção

Um agente é crioproteção utilizado como uma substituição para a água intracelular . O agente impede os cristais de gelo e a desidratação que ocorrem nas células . Glicerol esterilizado e dimetilsulfóxido esterilizados são frequentemente utilizados a uma concentração de 5 por cento a 15 por cento ( volume por volume), diluída em soro de vitelo fetal ou meio de crescimento ou , dependendo do tipo de célula .
Congelação e Armazenamento

células na mistura congelamento deve ser resfriado lentamente. Se um congelador programável não está disponível , criotubos pode ser embrulhado em tecido ou colocado em esferovite , o que pode retardar o processo de congelação . As células devem ser mantidas a menos de 80 graus Celsius durante 24 horas e , em seguida, transferida para azoto líquido durante a armazenagem a longo prazo .

Descongelamento

células congelados devem ser descongelados rapidamente . Um banho de água a 37 graus Celsius pode ser usado . Cuidados devem ser tomados com células armazenadas em nitrogênio líquido , no entanto, como o nitrogênio líquido pode entrar nos frascos e pode explodir no descongelamento. A mistura de congelação deve ser diluída em meio de crescimento . A viabilidade celular deve ser avaliado com o corante azul de tripan e as células cultivadas como normal.