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Protocolo de congelamento de células

Preservar células por congelamento é essencial para pesquisa, medicina veterinária e criação animal, permitindo armazenamento por longos períodos. Método deve reduzir ou prevenir dano celular. Agente crioprotetor e método dependem do tipo celular.

Preparação

Congele células saudáveis, ativamente crescendo, com 90% viabilidade. Evite manuseio brusco, centrifugação alta velocidade, pipetagem ou aspiração vigorosa para manter viabilidade e prevenir dano.

Crioprotetor

Agente substitui água intracelular. Previne cristais de gelo e desidratação. Glicerol esterilizado e dimetilsulfóxido (DMSO) esterilizado usados a 5-15% (v/v) diluídos em soro fetal bovino ou meio de crescimento, conforme tipo celular.

Congelamento e armazenamento

Resfrie lentamente mistura de congelamento. Se freezer programável indisponível, envolva crioviais em tecido ou coloque em isopor para retardar. Mantenha a -80°C por 24h, depois transfira a nitrogênio líquido para armazenamento longo prazo.

Descongelamento

Descongele rapidamente. Banho-maria a 37°C. Cuidado com células em nitrogênio líquido: pode entrar nos frascos e explodir ao descongelar. Diluir mistura em meio de crescimento. Avalie viabilidade com azul de tripano e cultive normalmente.