Protocolos de infecção por retrovírus

Retrovírus contêm genoma RNA encapsulado em capsídeo e envelope lipídico, com cadeias polipeptídicas que ligam a receptores em membranas de células hospedeiras. Ao contrário da maioria (DNA), informação hereditária está em RNA; carregam enzima transcriptase reversa, permitindo aderir ao DNA hospedeiro. Laboratórios seguem protocolos para infecção proposital de células DNA com esses vírus.

Preparação do laboratório

Equipamentos: 1 auxílio de pipeta, 1 pipetador, 1 capela de cultura, incubadoras 37°C e 32°C, centrífuga Eppendorf. Insumos: placas de cultura, pipeta Pasteur descartável, sobrenadante retroviral qualificado, polibrena e sulfato de protamina esterilizados por filtração.

Preparação da célula para infecção

Antes da infecção, células-alvo divididas em placa e incubadas overnight a 37°C com 5% CO₂. Objetivo: células 50% confluentes. Preparação prévia otimiza infecção. Laboratório Nolan (Stanford) recomenda iniciar infectando células NIH 3T3 para otimizar resultados.

Infecção das células

Após incubação, verifique saúde e confluência. Na capela, aspire material celular e aplique sobrenadante viral. Balance suavemente para distribuição uniforme. Spinoculação: centrífuga Eppendorf a 2.500 rpm por 90 min a 30°C. Após, incube a 32°C por 1-2 dias. Vírus substituído por células extraídas e incubadas para análise 3-7 dias após infecção inicial.