Procedimento para o teste ELISA

Anticorpos e antígenos

O ELISA normalmente usa vários componentes quimicamente modificados para gerar um teste para um dado antígeno. O primeiro passo é desenvolver um anticorpo para o composto testado. O anticorpo é purificado, modificado e ancorado/imobilizado em um poço de amostra para realizar o teste. O composto testado recebe uma marca fluorescente.

A indústria usa placa retangular padrão com "poços de amostra" — como pequenas tigelas ou tubos de ensaio moldados — para realizar múltiplos experimentos. Dimensões: 127,8 mm x 85,5 mm, padronizadas para caber em instrumentos analíticos de vários fabricantes. Placas típicas têm entre 6 e 96 poços; modelos mais novos têm centenas.

O teste

Quando uma solução contendo o composto testado e o composto marcado com cor são colocados no poço, competem pela ligação no anticorpo imobilizado. Quanto mais composto nativo, menos composto marcado consegue ligar. O poço é lavado para remover compostos não ligados (nativos e coloridos). O poço é avaliado quanto à quantidade de composto marcado restante, geralmente com espectrofotômetro.

Os resultados

Menos cor significa maior concentração do composto nativo. Pesquisadores montam uma "curva padrão" em série de poços com concentrações conhecidas do composto nativo. O teste ELISA é realizado em todos os poços e a diferença de cor ao longo dos padrões permite comparar e determinar concentrações desconhecidas nas amostras.

Testes ELISA detectam uma ampla variedade: vírus HIV, drogas, venenos, químicos. Têm vantagem de alta produtividade para grandes números de amostras e, em muitos testes, são muito custo-efetivos.

O ELISA também pode detectar anticorpos em solução de teste. Nesse caso, o antígeno (parte do composto que liga ao anticorpo) é imobilizado no poço, e os anticorpos de teste recebem marca de cor.