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Análise por Western Blot: Procedimento e Aplicações

Seja naturalmente ou artificialmente expressas, proteínas quase nunca são encontradas sozinhas. A análise por Western blot, ou imunoblotting, é usada para isolar e analisar uma proteína de interesse de uma mistura.

Procedimento

O Western blotting consiste em três etapas principais: eletroforese, na qual a mistura de proteínas é separada em bandas localizadas com base no tamanho e carga; transferência, na qual as proteínas são movidas de um gel de polímero para um substrato de papel; e desenvolvimento, no qual a banda de proteína de interesse é marcada e analisada.

Aplicações em Pesquisa

O Western blotting é amplamente usado em pesquisa biomédica. Como as proteínas são indicadores-chave da função celular, um Western blot pode fornecer informações sobre metabolismo e linhagem celular. A expressão de proteínas recombinantes também pode ser verificada e estudada usando um Western blot.

Aplicações em Medicina

Western blots são intensivos em mão de obra e demorados, e suas aplicações clínicas são correspondentemente limitadas. No entanto, são importantes no diagnóstico de algumas doenças, incluindo doença de Lyme, HIV e doenças priônicas como a Doença de Creutzfeldt-Jakob.

Histórico

A primeira demonstração de separação de proteínas em gel de polímero foi publicada em 1977. A transferência rápida e eficiente da proteína para papel por eletroblotting — crítica para a aceitação do método — foi demonstrada em 1979.

Nomeação

O termo "Western blot" faz parte de uma piada elaborada de cientistas. O procedimento análogo para caracterizar DNA é chamado de Southern blot em homenagem a seu inventor, George Southern. A versão de RNA é universalmente conhecida como Northern blot e, talvez inevitavelmente, a imunoblotting de proteínas é Western blotting.