Como Corar Géis de Agarose para Eletroforese

Visão Geral

Visualização de ácido nucleico ou proteína é essencial em eletroforese em gel de agarose. Sem corante, não se vê onde a amostra chegou, limitando severamente medições de tamanho molecular. Corar com corante comum e bem testado, como brometo de etídio (EtBr), que fluoresce sob luz UV quando intercalado em DNA/RNA. O corante mostra moléculas da amostra como marcas azul-escuro.

Itens Necessários

• Luvas e óculos de segurança
• Gel de agarose
• Brometo de etídio
• Pipeta (Gilson para pequenas quantidades)
• Buffer de carga

Instruções

1. Passo 1: Prepare o Corante

   Use luvas finas, protetoras e que permitam movimento livre. Com pipeta pequena, retire EtBr (ou corante equivalente) do recipiente.

2. Passo 2: Adicione Corante à Amostra

   Adicione 0,5 µg/mL do corante escolhido à amostra. Tampe e misture manualmente. Várias agitações são suficientes.

3. Passo 3: Adicione Buffer de Carga Negativamente Carregado

   Adicione buffer de carga com pipeta. Permite visualizar amostra corada a olho nu, em luz natural, eliminando necessidade de UV caro e prejudicial que degradaria moléculas de interesse. Xileno cianol é buffer comum, mas outros existem. Escolha buffer que migre na mesma velocidade da molécula alvo. Xileno cianol migra na velocidade de fragmentos de DNA de 5000 pares de bases (bp).

4. Passo 4: Carregue o Gel

   Use pipeta limpa para aplicar amostra nos poços no início do gel. Volume depende do tamanho dos pentes (espessura/comprimento do poço e espessura do gel). Corar a amostra, não o controle, para determinar parâmetros de interesse (ex: peso molecular) corretamente.

5. Passo 5: Alternativa — Southern Blotting

   Transfira DNA para membrana de nitrocelulose. Exponha a sonda de hibridização. Não é coloração, mas alternativa adequada, conforme Access Excellence.