Preparação cloranfenicol Plate

O cloranfenicol é um antibiótico de largo espectro que mata os micróbios bactérias por interferir com a sua capacidade de se replicar. Este antibiótico foi desenvolvido inicialmente para combater infecções em seres humanos , mas , de acordo com Drug.com , ele só é usado agora , a partir desta publicação , como último recurso, quando outras drogas não estão funcionando devido a efeitos colaterais graves, como anemia aplástica, anemia hipoplásica , trombocitopenia e granulocitopenia . O cloranfenicol é útil em um laboratório de pesquisa para experimentos de biologia molecular. Quando o cloranfenicol é preparado sobre uma placa , que pode ser utilizada para detectar a concentração de bactérias ou de isolar as estirpes de bactérias específicas para experiências posteriores . Coisas que você precisa
Água destilada
cloranfenicol
1,0 por cento triptona
0,5 por cento de extrato de levedura
1,0 por cento de cloreto de sódio (NaCl) , pH 7,0
95 por cento de etanol
Agar
garrafa de 2 litros
placa de agitação magnética
médias magnético barra de agitação
látex ou nitrilo luvas
escala Laboratório
Autoclave
30 estéreis placas de 10 cm & azul caneta marcação
Parafilm
folha de alumínio
fita Autoclave
Show Mais instruções
1

Coloque em um par de luvas de látex ou borracha nitrílica para preparar o caldo LB . Caldo LB é uma abreviatura comum para caldo Lisogenia , ou caldo Luria , e é tão utilizado como um meio de crescimento para a cultura de bactérias . Ela pode ser feita a partir do zero no laboratório, ou para poupar tempo que pode ser comprado em qualquer biologia molecular estoque fornecedor .
2

Coloque uma folha de papel de peso na balança. Pressione o botão de redução a zero da escala de modo que o peso do papel não está incluído no peso final . Adicionar pequenas quantidades de triptona de cada vez , até chegar a 10 g . Em seguida, dobre o papel pesar pela metade com a triptona no centro. Recolher o papel e pesar cuidadosamente usar o papel dobrado como um funil para adicionar o triptona para o frasco de 2 L . Siga este procedimento para pesar 5 g de extrato de levedura , 10 g de NaCl e 15 g de ágar.
3

Solte a barra de agitação para o balão e centralizar o balão sobre a placa de agitação magnética . Adicionar água destilada suficiente para trazer a solução até 1 litro.
4

Vire a placa de agitação , e assistir a barra de agitação . A placa deve ser definido na velocidade certa para permitir que a barra de agitação para se mover em um ritmo moderado , sem ficar preso nas paredes do recipiente . Ajuste as configurações , se necessário. Permitir que a solução para sentar-se sobre a placa até que todos os reagentes foram dissolvidos .
5

Desligue a placa de agitação , e esticar um pedaço quadrado de 3 polegadas de parafilm sobre a parte superior do frasco, a cobrir e proteger o frasco de quaisquer contaminantes ou derrame. Em seguida cobrir o parafilme com um pedaço de folha de alumínio e adicionar um pedaço de fita de marcação autoclave no topo da folha .
6

Coloque a solução numa autoclave em ciclo líquido durante 20 minutos a 15 psi e esterilizá-lo .
7

Retirar o balão da autoclave. Vai ser muito quente. Permitir que a solução arrefecer até cerca de 55 graus celsius, por deixá-lo sentar-se à temperatura ambiente , ou colocando o frasco em um banho de 65 graus celsius água.
8

Spray e limpar o trabalho superfície com 95 por cento de etanol para evitar a contaminação . Também é uma boa idéia para mudar suas luvas antes de manusear as placas.
9

Mark o lado e tampa de cada placa com faixa azul vertical, utilizando a caneta de marcação. Isto indica as placas contêm caldo LB e cloranfenicol .
10

Adicionar suficiente antibiótico cloranfenicol para a solução de modo a que a concentração atinge o valor desejado , dependendo das bactérias vai ser trabalhado. A concentração final comum é 100ug/ml . Para esta concentração , adicionar 1 ml de estoque de cloranfenicol ( em 25mg/ml ) . Agitar o balão em um movimento circular, ou colocá -lo de volta na placa ímã mexa por 1 a 2 minutos para ter certeza que é bem misturado .
11

Limpe a boca do frasco com etanol, e, em seguida despejar a solução para as placas , até encher até meio com a solução . Deixe as placas endurecer , cubra cada prato com uma tampa, e armazená-los de cabeça para baixo a 4 graus celsius , para evitar que sequem.