Como medir Protein Expression

expressão de proteínas medida pode fornecer pistas sobre a actividade dos genes em seu corpo, porque as proteínas funcionam como o catalisador final das atividades celulares. No entanto , de acordo com um artigo na edição de " LabMedicine ", patologistas e biólogos março 2010 ainda estão para chegar a acordo sobre a microscopia de campo claro ou microscopia de fluorescência como o método mais adequado para medir a expressão da proteína. Digitalização brightfield Whole- slides não só é fácil de usar e oferece estabilidade cromógeno , mas pode proteger lâminas de vidro por mais tempo. Coisas que você precisa
tecido celular
Deslize
anticorpo secundário biotinilado
peroxidase estreptavidina - rábano
3,3 '- diaminobenzidina
câmera linha -scan Cor
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1

Coloque o tecido celular em um slide e adicionar um anticorpo secundário biotinilado , seguido por uma peroxidase estreptavidina- rábano e esperar dois minutos.
2

Despeje quatro gotas de 3,3 '- diaminobenzidina na amostra e esperar dois minutos para a mancha marrom de espalhar totalmente na amostra .
3

Coloque um corte histológico do manchado espécime em uma plataforma motorizada em uma sala bem iluminada. Ajustar cuidadosamente a câmera linha -scan cor para 20X ou 40X de ampliação e digitalizar o espécime. Alinhe as listras da imagem e comprimir a imagem digital em um tamanho legível.
4

Imprima a imagem digital para análise manual ou alimentar a imagem em programas de computador para análise assistida por tecnologia. Observar o padrão de manchas como apresentado na imagem . Analise cuidadosamente a expressão da proteína com base nos padrões das manchas no espécime.
5

Avaliar a expressão da proteína em células de câncer e estroma , analisando a concentração de proteína expressa no tecido celular.

6

Use os padrões de cores para quantificar a expressão da proteína em uma escala de 0 a 3 + . Use o marcador para calcular HER -score ou o escore Allred .