Como Medir Expressão de Proteína

Materiais Necessários

• Tecido celular
• Lâmina
• Anticorpo secundário biotinilado
• Estreptavidina-peroxidase de raiz forte
• 3,3'-Diaminobenzidina (DAB)
• Câmera de varredura linear colorida

Procedimento

1. Coloque tecido celular na lâmina. Adicione anticorpo secundário biotinilado, seguido de estreptavidina-peroxidase. Aguarde 2 minutos.
2. Adicione 4 gotas de DAB no espécime. Aguarde 2 minutos para coloração marrom espalhar totalmente.
3. Coloque corte histológico do espécime corado em plataforma motorizada em sala bem iluminada. Ajuste câmera colorida para ampliação 20x ou 40x e faça varredura. Alinhe listras da imagem e comprima arquivo digital para tamanho legível.
4. Imprima imagem digital para análise manual ou insira em software para análise auxiliada por computador. Observe padrão de manchas. Analise expressão proteica baseada nos padrões de coloração.
5. Avalie expressão em células cancerosas e estroma examinando concentração de proteína expressa no tecido.
6. Use padrões de cor para quantificar expressão em escala 0 a 3+. Use escore para calcular HER-score ou Allred score.