Inclusão em Parafina Protocolo

Cientistas geralmente precisam solidificar amostras biológicas para a seção -los. Isto faz com que seja mais fácil para que os cientistas adicionar tinturas , anticorpos e sondas para a amostra biológica . Ele também reduz a sobreposição de várias camadas de células . Cientistas usar parafina como uma matriz para o disco de corte , uma vez que a parafina não se mistura com água . A parafina é um tipo de hidrocarboneto . As amostras biológicas contêm água, de modo que os cientistas devem desidratar as amostras usando banhos de etanol cada vez mais concentrados . Xylene

Cientistas remover o etanol utilizando xileno . Em seguida, eles usam cera de parafina derretida para remover o xileno . Para a microscopia de luz , as seções de parafina são geralmente de cinco mm de espessura . A cera de parafina não é forte o suficiente para as fatias mais finas. Cientistas reidratar o tecido, utilizando xileno em primeiro lugar, seguida de etanol . Em seguida, eles lavar a amostra biológica com água destilada para evitar a contaminação.
Fixação

tecidos parafina - encaixados são geralmente fixados com formalina tamponada neutra , que é a versão comercial do formaldeído . Isto inclui paraformaldeído e metanol , o qual impede que a quantidade de formaldeído a partir da conversão em ácido fórmico . Tecidos em fatias finas necessita de 48 horas de fixação à temperatura ambiente para histologia óptimo , que é o estudo da anatomia microscópica . Caso contrário , o tecido vai endurecer e tornar-se frágil . Antes da transformação , o tecido é normalmente armazenado em 70 por cento de etanol a uma temperatura de 4 graus Celsius.

Parafina Processadores

Os cientistas costumam usar processadores de parafina para enviar o tecido através de banhos que, gradualmente, desidratar o material antes de parafina quente pode entrar através dos tecidos . Cientistas executar o processador durante a noite . O processador apenas aquece o tecido durante um determinado período de tempo dependente do tecido para fazer isso não se tornar dura e quebradiça . O processador utiliza um vácuo que acelera a permeação de parafina e remove as bolhas de ar . Uma vez processado , os tecidos são armazenados em cassetes , à temperatura ambiente .
Cera de fusão

A parafina derreter durante uma hora antes da adição do tecido . Toda a cassete é colocada num banho de parafina de 65 graus Celsius durante 15 minutos . Um dissipador de calor de alumínio frio resfria a cera de parafina por 20 minutos. Quando as rachaduras de cera ou os tecidos não estão alinhados corretamente , o cientista derrete a parafina e repete o processo .
Corte

Quando o corte dos tecidos , o cientista recebe o banho de água a 35 a 37 graus Celsius . A água é fresca e deionizada . Os blocos são colocados de bruços sobre um bloco de gelo ou dissipador de calor por 10 minutos. A lâmina corta o bloco em seções. Dois problemas que podem ocorrer são pobres ribboning e fragmentando espécimes. Quando o fragmento de espécimes , a água é muito quente. Se o bloco não fita bem, você deve colocá-lo novamente no bloco de gelo e firmar a cera antes de começar novamente .