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Protocolo de Lise Celular para Isolamento de Proteínas: Buffers, Condições e Métodos Alternativos

Pequenas proteínas podem ser preparadas sinteticamente, mas por muitas razões não há maquinaria sintética melhor que a própria célula. Tipicamente, primeiro passo no isolamento de proteínas é lise celular.

Lise Celular

Palavra "lise" vem de raiz grega significando "soltar". Na lise celular, forças mantendo membrana celular juntas são desfeitas, causando ruptura. Conteúdos da célula são então liberados na solução circundante, incluindo proteína de interesse. Geralmente feito por adição de solução química chamada buffer de lise.

Preparação do Buffer de Lise

Miríade de diferentes soluções de lise disponíveis comercialmente, ou receitas comuns podem ser usadas para preparar buffer de lise de químicos comuns. Melhor buffer varia dependendo do tipo celular, proteína a isolar e aplicação final, mas em geral, solução de lise contém molécula detergente (frequentemente NP-40 ou Triton-X) que dissolve membrana celular, junto com buffers, quelantes e inibidores de protease para prevenir dano à proteína uma vez liberada do ambiente protetor da célula.

Condições de Lise

Buffer de lise geralmente usado em gelo, e processo de lise permitido prosseguir sob condições frias. Solução suavemente balançada para incentivar dispersão uniforme de células e produtos de lise. Após cerca de 5 a 10 minutos, solução de lise geralmente neutralizada para prevenir atividade adicional. Estas precauções reduzem dano à proteína e reduzem quantidade de detritos extraneous produzidos que depois terão que ser removidos.

Outros Métodos de Lise

Embora lise química seja mais gentil e mais comumente usada, métodos mecânicos mais agressivos para lisar células podem ser usados em alguns casos. Estes incluem sonicação, ciclos repetidos de congelamento-descongelamento e homogeneização, que é processo de amassamento. Consulte literatura técnica para encontrar método mais apropriado para seu caso específico.