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Definição de Radiação Híbrida

Mapeamento por Radiação Híbrida

O mapeamento por radiação híbrida é um processo de engenharia genética originalmente desenvolvido para construir mapas de longo alcance de cromossomas de mamíferos e descobrir a localização de marcadores genéticos relativos uns aos outros. O mapeamento por radiação híbrida baseia-se num modelo estatístico para medir distâncias entre marcadores de ácido desoxirribonucleico (ADN) e a sua ordem nos cromossomas. Marcadores de ADN são muito curtos. Sequências cíclicas de ADN estão contidas dentro de um genoma. O mapeamento por radiação híbrida provou ser indispensável para localizar genes de doenças humanas no genoma. A localização relativa destes marcadores de ADN pode ser coalescida num mapa físico conhecido como mapa genético.

Passos da Técnica de Radiação Híbrida

O primeiro passo da técnica de radiação híbrida envolve amplificação e purificação de ADN semelhante ao primeiro passo em qualquer projeto de sequenciação. Radiação é então empregada para dividir o ADN em segmentos menores e estes segmentos são então incorporados numa célula híbrida. A célula híbrida de radiação é então cultivada para crescer em grandes quantidades. Reação em cadeia da polimerase (PCR) e análise de ligação são usadas para resolver a distância entre marcadores de ADN. Pode verificar facilmente a presença de vários marcadores genéticos. Quanto mais próximos dois marcadores genéticos estiverem um do outro, menor a probabilidade de serem separados pela radiação que divide o ADN.

Procedimento/Técnica

O procedimento da técnica de radiação híbrida envolve o uso de duas linhas celulares diferentes que são incapazes de sobreviver num meio tóxico. No entanto, contêm genes que podem resistir ao meio tóxico quando combinados numa única célula (devido à produção de uma enzima resistente à toxina). A linha celular em estudo é irradiada (geralmente por Raios-X), causando quebras no ADN. Isto faz com que o cromossoma se quebre em vários segmentos que são subsequentemente fundidos ou integrados com a outra linha celular, produzindo um híbrido. Como o híbrido incorporou genes de ambas as linhas celulares e pode produzir a enzima necessária, sobreviverá no meio tóxico.

Cultivo

A célula híbrida que sobrevive é agora cultivada em grandes quantidades. Isto amplifica o ADN herdado da linha celular irradiada. A amostra resultante é então submetida a PCR para amplificar dois marcadores genéticos específicos. Ao correr os produtos de PCR num gel, pode ser verificado se ambos os marcadores estão incorporados na linha celular resultante. As frequências com que marcadores de ADN são retidos em cada clone (amostra cultivada) podem ser calculadas usando métodos estatísticos.

Aplicação

Os mapas gerados de cromossomas para múltiplas espécies como humanos, rato, rato e outros genomas facilitam a geração de mapas altamente detalhados e precisos usados no estudo de doenças multifactoriais. Outras aplicações incluem determinação de localizações cromossómicas de 26 cDNAs humanos novos de comprimento total (ADN cromossómico).