Como determinar anticorpos: teste ELISA

O teste ELISA (ensaio de imunoabsorção enzimática) é o teste comercial mais comum para rastrear presença de anticorpos. Usado para rastrear uso de drogas, gravidez, AIDS, hepatite, entre outras condições. Popular pela facilidade de uso e baixo custo.

O que você vai precisar

• Amostra de soro
• Placa ELISA
• Antígenos que conjugam o anticorpo testado
• Anticorpos enzimáticos ou anticorpos secundários
• Indicador de mudança de cor enzimático
• Toalhas de papel
• Óculos de proteção

Instruções

1. Coloque antígeno conhecido na superfície de vários poços. Cubra cada poço com 50 µL de fluido IgG. Não perturbe por 5 minutos. Enxágue poços com água da torneira. Repita enxágue 5 vezes. Bata poço em toalha de papel para secar. Não limpe os poços.

2. Adicione amostras de fluido corporal (soro) às placas. Amostras podem conter solução conjugada e competidora nos poços. Isto ligará se anticorpos estiverem presentes. Amostras de soro devem ser diluídas para conjugar ao antígeno da etapa 1.

3. Adicione proteína (ex.: caseína) aos poços. Impede outras proteínas não testadas de aderir à placa.

4. Lave a placa enxaguando com água da torneira suavemente sobre os poços. Bata lateral da placa em toalha para remover excesso. Repita lavagem 4 vezes. Não limpe poços. Adicione anticorpo correspondente ao testado aos poços.

5. Lave novamente (enxágue suave, bata na toalha, repita 4 vezes). Não limpe poços. Repita lavagem 4 vezes adicionais. Remove antígeno não ligado. Poços agora contêm apenas complexos anticorpo-antígeno testados. Lave para remover conjugados de anticorpo-enzima não ligados.

6. Adicione anticorpos secundários (anti-anticorpos) aos poços. Estes ligam-se aos anticorpos de detecção. Secundários são conjugados ao indicador de mudança de cor e ao antígeno da etapa 1.

7. Lave a placa (enxágue, bata, repita 4 vezes). Remove anticorpos enzimáticos extras não ligados.

8. Aplique indicador de mudança de cor enzimático à placa. Poços com anticorpos testados mudarão de cor.

9. Observe poços para mudança de cor, indicando presença do anticorpo na amostra de fluido corporal.