Como Calibrar um HPLC

HPLC é um teste de cromatografia líquida de alta performance que força solventes através de uma coluna sob altas pressões de até 400 atmosferas. A alta pressão faz este teste de cromatografia realizar-se mais rápido que outros testes de cromatografia com métodos de detecção para HPLC automatizados e sensíveis. Para realizar HPLC, uma série de padrões de calibração contendo os compostos específicos nos quais você está testando precisa ser preparada usando uma curva de calibração.

Materiais Necessários

• Coluna HPLC
• Amostras
• Água HPLC
• Padrões para amostras
• Balões volumétricos
• Microsoft Word ou Excel

Instruções

1. Prepare uma série de diluições para preparar padrões de calibração contendo os compostos que serão analisados. Faça os padrões variando de 20 microgramas por mililitro a 100 microgramas por mililitro usando balões volumétricos. Use água grau HPLC para suas diluições. Se você estiver analisando cafeína, por exemplo, você vai querer obter um padrão para cafeína e diluí-lo para criar uma curva padrão.
2. Prepare sua amostra que você quer analisar no HPLC. Por exemplo, se você quiser analisar cafeína, pode escolher chá ou café.
3. Dilua a amostra com água grau HPLC para que esteja na faixa de suas amostras.
4. Injete as amostras na coluna HPLC. Siga as instruções específicas fornecidas pelo fabricante para sua coluna particular.
5. Faça um gráfico dos dados obtidos para suas soluções padrão com área do pico versus concentração da amostra.
6. Determine a concentração de cada componente presente em sua amostra a partir da curva padrão que você criou.