casa |  | Saúde e Doença >  | Saúde Pública e Segurança | Pesquisa Médica

O que é Eletroforese em Gel

Preparação da Amostra

Eletroforese em gel: método de separar, identificar e caracterizar misturas de proteínas ou ácidos nucleicos. Amostras desnaturadas migram após aplicação de eletricidade em gel fino, úmido, tipicamente poliacrilamida ou agarose. Amostras separadas coradas para visualização. Usada em pesquisa de proteínas/ácidos nucleicos e hospitais para identificar proteínas/DNA incomuns diagnosticando doenças, defeitos genéticos, relações genéticas.

Quando detergente como dodecil sulfato de sódio (SDS) adicionado a proteína/ácido nucleico, associa-se e desdobra (desnatuta) proteínas/ácido nucleico. Desnaturação proteica facilita determinação de peso molecular em eletroforese. Quantidade amostra: 100-500 ng/banda proteínas, 5-100 ng/banda ácidos nucleicos, volume total ~25-40 µL.

Géis

Gel, tipicamente poliacrilamida ou agarose, preparado ou comprado para separar proteínas. Parece gelatina: maioria água, mas sólido para manuseio. Contém buffer para controlar pH. Muito fino (1-2 mm) retangular. Um lado como pente com dentes faltando: espaços = poços (poços de amostra).

Carregamento da Amostra

Gel em câmara com buffer; proteínas desnaturadas adicionadas aos poços. Amostras de pesos moleculares conhecidos nos poços externos. Géis com quantidades variadas de poliacrilamida. Baixa força (4%) melhor para alto peso molecular; alta força (12%) para baixo peso molecular. Gel gradiente varia força e separa ampla gama proteínas com perda de resolução.

Eletromigração

Com alta voltagem, proteínas desnaturadas movem-se para fundo do poço. Maior peso → mais lento. Desligada eletricidade → proteínas param. Remove gel da câmara, balança em corante. Corantes orgânicos (azul Coomassie) ou metálicos para proteínas; fluorescentes (brometo de etídio) para ácidos nucleicos.

Análise de Resultados

Com remoção excesso corante, misturas separam em bandas como escadas. Posição bandas comparada a distância padrões → peso molecular amostra em cada banda. Gel desidratado com álcool e seco para armazenamento. Intensidade cor banda medida → concentração proteína em cada banda.

Desenvolvimento de Protocolos

Protocolos padrão para proteínas conhecidas. Se amostra desconhecida, força gel, tipo buffer, pH, voltagem, tempo, corante podem precisar otimização para melhor separação e sinal.