Como Analisar Dados de Citometria de Fluxo

Citometria de fluxo é o processo de analisar e contar células e partículas usando a teoria de espalhamento de luz e excitação de luz. As células são forçadas através de uma bainha uma a uma e passam pelo feixe de um laser. O laser excita os produtos químicos dentro das células. Diferentes tipos de células emitem diferentes tipos de luz. Detectores ópticos ou lentes captam e medem a luz, transformando a luz em um fluxo de dados. Ao analisar os dados, técnicos podem determinar a distribuição de células e ajudar médicos e pesquisadores a tomar decisões sobre tratamento.

Instruções

1. Configure os parâmetros do citômetro. Todo citômetro tem um componente de computador que aceita a luz emitida das células e converte a quantidade e qualidade da luz em dados acessíveis. Como existem diferentes tipos de células, há uma grande quantidade de dados criada. Configurar os parâmetros dos dados necessários desacelera o fluxo de informação para um nível gerenciável. Algumas opções incluem definir o nível de tensão, ajustar parâmetros de pulso do laser ou definir o limiar de luz.
2. Escolha os filtros em cada lente óptica. Filtros que cortam largura de banda específica para cada lente permitem que o citômetro reconheça as diferentes propriedades químicas de cada célula. Também permite que o citômetro reconheça se a luz é refletida diretamente à frente, como espalhamento frontal (FS) ou se é refletida em um ângulo de 90 graus em espalhamento lateral (SS).
3. Escolha aquisição logarítmica ou linear. Aquisição linear são os dados brutos gerados pelo citômetro. Mostra o tipo de célula, ou a composição química das células que fluem através do feixe de laser. A função logarítmica vai um passo além. Usa uma função matemática para projetar células adicionais que podem não ser detectáveis pelo citômetro. Por exemplo, células podem mostrar um composto químico que é um subproduto de uma infecção viral. Mesmo que o vírus seja muito pequeno para ser detectado pelo fluxo de luz, a função logarítmica hipótese a presença do vírus baseada na composição química das células.
4. Selecione histogramas de um ou dois parâmetros. Estes são tipos de gráficos usados para mostrar os dados coletados pelo citômetro. Um histograma de um parâmetro é apropriado se os dados são todos plotados em um eixo "positivo", significando que toda a luz é refletida e medida. Uma maneira fácil de pensar nisso é imaginar um gráfico de barras, com níveis na esquerda e na base do quadro. A informação é plotada entre estes dois parâmetros. Mas para aquelas células que absorvem quantidades diferentes de luz, um histograma de dois parâmetros é usado. Isso permite que os dados sejam plotados em ambos um eixo positivo e negativo.