Como Solucionar Problemas de Genotipagem

Genotipagem é usada para pesquisar diferenças genéticas em células através do uso do DNA do espécime. O procedimento laboratorial usado para genotipagem é PCR (Reação em Cadeia da Polimerase). Usar PCR requer o uso de primers. Às vezes cientistas precisam desenvolver seu próprio primer, e isso, por si só, pode causar um problema. Além disso, solução de problemas pode surgir ao fazer um experimento de PCR pois os resultados podem não ser claros. Existem muitas maneiras diferentes de solucionar problemas do seu experimento de PCR para obter resultados precisos.

Materiais Necessários

• Kit PCR
• Laboratório
• Luvas
• Pipetas
• Água destilada

Instruções

1. Sempre use luvas ao trabalhar em laboratório. Limpe todos os equipamentos lavando e esterilizando pipetas. Além disso, limpe sua área de trabalho e use luvas de laboratório adequadas durante seu experimento.
2. Execute um controle sem DNA contido dentro. Este será considerado seu controle negativo.
3. Execute um controle positivo, se disponível, para seu espécime de teste específico. Este conterá sequência de DNA conhecida.
4. Prepare uma série de diluições para sua amostra de DNA. Por exemplo, dilua as amostras com água destilada. Executar uma série de diluições representará qual concentração a amostra de DNA amplificará.
5. Execute uma reação de PCR diferente para cada primer se você estiver tendo problemas com o produto de PCR.
6. Mude a temperatura se as bandas não estiverem amplificando.
7. Peça novos primers. É possível que haja algo errado com seu primer e você precise apenas de um novo.
8. Use um primer diferente se você estiver tendo problemas com seu experimento e já pediu um novo primer. Pesquise literatura primária de estudos que usaram o mesmo espécime. Veja como eles desenvolveram seu próprio primer.
9. Purifique seu DNA através de extração com hidróxido de sódio se todos os outros métodos de solução de problemas não funcionaram.