Teoria da Lise Alcalina

Cientistas usam lise alcalina para extrair DNA plasmídico de bactérias para uso em experimentos genéticos. Plasmídeos são pequenas moléculas circulares de DNA contendo um pequeno pedaço de código genético para estudo.

Por Que Lise Alcalina

O protocolo de lise alcalina consiste em uma série de soluções adicionadas a um pellet bacteriano contendo DNA plasmídico. A alcalinidade aumentada da solução faz com que as células se rompam. Este método de extração protege o DNA plasmídico enquanto destrói o DNA genômico e desnaturaliza proteínas celulares, fornecendo ao cientista uma amostra relativamente pura.

SDS e NaOH

Alcalina descreve os dois principais produtos químicos usados para causar a lise de células individuais. Dodecil sulfato de sódio (lauril) (SDS) é um detergente que desestabiliza a célula criando buracos na membrana celular. Hidróxido de sódio (NaOH) ajuda a quebrar a parede celular fazendo com que a célula se desintegre e libere seu material genético em solução.

Por Que o DNA Plasmídico Sobrevive

Uma propriedade adicional do NaOH no protocolo de lise alcalina é desestabilizar a ligação de hidrogênio entre pares de bases de DNA. Isso desnaturaliza DNA genômico e DNA plasmídico em fitas simples. A adição de acetato de potássio à solução neutraliza a alcalinidade e o pequeno DNA plasmídico é capaz de renaturalizar e dissolver na solução. O DNA genômico é muito grande para renaturalizar todo o seu comprimento. Ele e as proteínas desnaturalizadas precipitam durante a centrifugação, deixando o DNA plasmídico em solução.