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Células aderentes: protocolo de cultura

Células em cultura são ou em suspensão (células sanguíneas) ou aderentes (fibroblastos) requerendo superfície para aderir. Superfícies podem requerer revestimento com matrizes extracelulares dependendo do tipo celular e estudo. Todas culturas requerem condições assépticas.

Ambiente ideal

Maioria dos tipos celulares cultiva-se em meio DMEM (Dulbecco's modified Eagle's medium) ou RPMI (Roswell Park Memorial Institute) com 10% soro fetal bovino, 2 mM glutamina e antibióticos (ex: 100 UI penicilina e 0,1 mg/mL estreptomicina). Mantidas em incubadora umidificada a 37°C e 5% CO₂.

Subcultura (Passagem)

Verifique células diariamente para infecção, morte ou crescimento. Quando frasco atinge 80% de confluência, divida para manter saúde e fase log de crescimento. Remova meio, lave em PBS. Células aderentes requerem tripsina e EDTA para remover proteínas de adesão. Agitação suave remove células. Adicione meio para neutralizar tripsina/EDTA.

Replantio

Células diluídas e solução tripsina/EDTA podem ser centrifugadas para pelletar e lavar. Ressuspenda em meio, dilua e replante em novos frascos. Cada divisão aumenta número de passagem em 1.

Troca de meio

Meio deve ser trocado 2x/semana: remova meio velho, substitua por novo aquecido.