As células aderentes protocolo

células em cultura são ou uma forma em cultura em suspensão , tais como células do sangue, ou de células , tais como fibroblastos que requerem uma superfície à qual podem aderir . Algumas das superfícies pode necessitar de revestimento em diferentes matrizes extracelulares , dependendo do tipo de célula e estudo . Todas as culturas de células necessitam de ser realizado são as condições assépticas . Ambiente óptima

A maioria dos tipos de células podem ser cultivadas em meio de Eagle modificado por Dulbecco ( DMEM ) ou Roswell Park Memorial Institute ( RPMI ) com a adição de 10 por cento de soro fetal de bezerro , 2 milimoles do glutamina e antibióticos amino ácido , por exemplo , 100 unidades de penicilina e 0,1 miligramas por mililitro de estreptomicina . As células são mantidas em seus meios de comunicação em uma incubadora umidificada a 37 graus Celsius e 5 por cento de dióxido de carbono .
Splitting

As células devem ser verificadas diariamente para a infecção , a morte ou o crescimento . Uma vez que o frasco de cultura de tecido é de 80 por cento revestido em células , as células devem ser divididos para manter a saúde das células e na fase log de crescimento . Meios são retirados e as células são lavadas em solução salina tamponada com fosfato . As células aderentes requerem a adição de tripsina e ácido etilenodiaminotetracético ( EDTA ) para eliminar as proteínas de adesão celular . Agitação suave deve remover as células. Precisa de mídia a ser adicionado para neutralizar a solução de tripsina /EDTA .

Subcultura

As células diluídas ea solução tryspin /EDTA pode ser centrifugado para sedimentar e lavagem as células . As células podem ser re - suspensas em meio e diluídas e plaqueadas de novo em novos frascos . Cada vez que as células são dividir o número de células passagem é aumentada em um.
Mídia Mudança

mídia deve ser mudado duas vezes por semana , removendo os meios de comunicação antigos e substituindo com novo , aquecido mídia.