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Métodos de diluição em ágar

Nos métodos de diluição em ágar, soluções contendo número específico de microrganismos são colocadas em placa de ágar rico em nutrientes e inoculadas com concentrações variadas de um agente antimicrobiano. A placa é incubada por cerca de 24 horas e a turbidez, sedimento de crescimento ou quantidade de colônias microbianas presentes é avaliada. Microrganismos são classificados como sensíveis, intermediários ou resistentes à atividade antimicrobiana.

Concentração Inibitória Mínima (CIM)

• O objetivo da diluição em ágar é determinar a menor concentração de agentes antimicrobianos, como antibióticos, desinfetantes ou conservantes, necessária para destruir ou prevenir crescimento microbiano, chamada concentração inibitória mínima (CIM). CIM é medida em miligramas por litro, e valores obtidos são usados para medir eficácia de agentes antimicrobianos — por exemplo, monitoramento de resistência a antibióticos.

Método de Suspensão de Colônias

• Este método envolve transferir pequena amostra de colônias microbianas selecionadas para tubo de vidro contendo solução salina. O tubo é agitado vigorosamente e deixado em repouso. Turbidez é medida como sinal de crescimento microbiano comparando conteúdo do tubo com padrão laboratorial como padrão McFarland. A comparação é melhor feita contra fundo branco em sala com iluminação adequada. O método de suspensão de colônias leva aproximadamente cinco minutos por amostra.

Método de Crescimento

• No método de crescimento, colônias microbianas selecionadas são colocadas em tubo contendo meio rico em nutrientes. O tubo é então incubado entre 35 e 37 °C (95-99 °F) enquanto é agitado simultaneamente. Este processo leva aproximadamente duas a seis horas, dependendo da taxa de crescimento do microrganismo. Após conclusão, turbidez é avaliada usando o mesmo padrão do método de suspensão de colônias.

Método de Crescimento Usando Culturas Noturnas

• Colônias microbianas em meios ricos em nutrientes são incubadas durante a noite. Após incubação, a densidade óptica de cada amostra é medida a 600 nm. A amostra é então diluída com meio nutritivo na proporção 1:100 e separada em cinco diluições adicionais a 1:10. Quatro das novas diluições são espalhadas em placa de ágar e incubadas durante a noite. No dia seguinte, o número de colônias formadas é contado e unidades formadoras de colônia por mililitro é calculado.