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Protocolos de Preparação de Gradiente OptiPrep

OptiPrep: Preparação de Gradientes de Iodixanol para Pesquisa Biomédica

OptiPrep é nome comercial de solução estéril de endotoxina a 60% de iodixanol, químico originalmente desenvolvido como meio de contraste para raio-X. Endotoxinas são moléculas estruturais de bactérias, reconhecidas pelo sistema imune. Laboratório norueguês Axis-Shield produz esta solução, amplamente usada em pesquisa biomédica, incluindo tráfego de membranas celulares, genética de vírus e bactérias.

Protocolo de Cloreto de Sódio

• Preparação de gradiente OptiPrep de propósito geral usando cloreto de sódio como balanceador osmótico, mantendo concentração da solução balanceada. Técnicos fazem solução de trabalho a 50% iodixanol diluindo OptiPrep com diluente padrão. Adicionam 0,85% cloreto de sódio ou 0,25 M sacarose e Tris-HCl pH 7,4 à preparação do gradiente. Segundo Axis-Shield, macromoléculas tradicionalmente purificadas em gradientes com altas concentrações de sacarose, glicerol, sais de metais alcalinos ou pesados. OptiPrep oferece alternativa para isolá-las sob soluções menos concentradas.

Protocolo para Estudo de HPV

• HPV (papilomavírus humano) ataca membranas mucosas, causando verrugas genitais e úlceras que evoluem para tumores. Protocolo OptiPrep relaciona-se ao estudo do material genético do vírus, inclui preparação de gradiente de OptiPrep. Técnicos preparam gradiente a 46% misturando: 70 ml OptiPrep, 10 ml PBS (fosfato salino tamponado), 12,5 ml cloreto de sódio, 45 µL cloreto de cálcio, 25 µL cloreto de magnésio, 210 µL cloreto de potássio. Preparação protegida da luz, armazenada em temperatura ambiente até 2 meses.

Isolamento de Células Dendríticas

• Células dendríticas parte do sistema imune de mamíferos, presentes em tecidos próximos à pele e revestimento interno de órgãos (estômago, intestinos). Protocolo usa OptiPrep no isolamento. Técnicos misturam OptiPrep em solução de 8% cloreto de sódio, buffer Tricine pH 7,4 e EDTA (ácido etilenodiaminotetraacético). Gradiente armazenado a até 4°C (39,2°F) por um mês.