Antes dos testes de DNA, a determinação de paternidade baseava-se em vários métodos:
A tipagem ABO e Rh da mãe, filho e suposto pai podia excluir combinações incompatíveis, mas não podia definitivamente provar paternidade.
Alelos HLA compartilhados sugeriam uma relação biológica, mas eram limitados por combinações raras únicas e correspondências coincidentes.
Traços físicos (características faciais, proporções corporais, cor do cabelo) eram examinados; altamente subjetivo e pouco confiável devido à variação familiar e influência ambiental.
Marcadores genéticos herdados direcionados (enzimas, proteínas); se o suposto pai não possuísse os marcadores da criança, a paternidade podia ser excluída.