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Técnica de Perfusão: Protocolo para Fixação Tecidual em Pesquisa

Princípio e Aplicação

A técnica de perfusão proporciona fixação rápida e uniforme de todas as células do tecido. Uma solução fixadora de paraformaldeído a 4% é administrada pelo sistema vascular, permitindo identificar o sítio-alvo de fármacos em órgãos específicos e compreender a organização estrutural e funcional do cérebro humano.

Materiais Necessários

• Animal de laboratório (rato ou macaco)
• Bomba de perfusão e béquer
• Fixador: paraformaldeído a 4%
• Agulhas de seringa
• Equipo de perfusão
• Tesoura, bisturi, pinças
• Solução salina a 0,9%
• Caixa de gelo

Procedimento Passo a Passo

1. Prepare o fixador fresco: Dissolva 40 g de paraformaldeído em 800 ml de água. Aqueça a 60 °C sob agitação. Resfrie a 4 °C. Ajuste pH para 9,5 com ácido acético glacial (use pHmetro).
2. Monte a bomba de perfusão: Conecte peças de vidro e agulha de perfusão. Passe 100 ml de água pela tubulação para limpar resíduos. Coloque o béquer com fixador na caixa de gelo.
3. Prepare o circuito: Abra a ponta do tubo de perfusão no béquer com fixador. Ajuste volume conforme tamanho do animal. Regule a válvula para gotejamento lento e constante. Feche a válvula. Encha o aparelho com solução salina a 0,9% (p/v).
4. Prepare o campo cirúrgico: Organize instrumental. Anestesie o animal (ketamina 0,5 mg/kg). Posicione em decúbito dorsal.
5. Exponha o coração: Incisão ao longo do diafragma. Corte tecidos conjuntivos na base do diafragma com tesoura grande (ponta romba). Exponha o coração. Segure-o com pinça e insira agulha no ventrículo esquerdo.
6. Inicie a perfusão: Abra a válvula para fluxo de salina. Verifique fluxo livre e batimentos cardíacos contínuos. Quando o sangue for substituído por salina, troque para paraformaldeído a 4%.
7. Finalize e colete: Pare a perfusão. Disseque o tecido de interesse. Mantenha no mesmo meio a 4 °C.

Observações de Segurança

Paraformaldeído é tóxico e potencial carcinógeno. Use EPI adequado (luvas, óculos, capela de exaustão). Descarte resíduos conforme normas de biossegurança.