Objetivo da Análise de Expressão de Proteína

O estudo de proteínas é um procedimento importante na biologia, realizado em ambos os laboratórios de diagnóstico e pesquisa na academia e na indústria . Análise da expressão de proteína de diagnóstico é usado para detectar a presença de doenças ou condições fisiológicas anormais . Na pesquisa que é utilizado na produção de proteínas bio -engenharia para posterior estudo científico ou no desenvolvimento de medicamentos . Protein Expression

A expressão de proteínas é muito simplesmente a produção de uma proteína a partir de uma sequência definida de aminoácidos , que por sua vez é determinado por uma sequência genética definida . Compreender estas sequências permite um investigador para modificar uma proteína de diversas formas - por exemplo , pela colocação de uma etiqueta fluorescente sobre a proteína de modo a poder ser detectado , ou através da remoção de porções da proteína que possam interferir com a produção ou processamento por uma célula .

Métodos e Ferramentas para Análise da expressão da proteína

expressão de proteínas é analisada por meio de tecnologias e procedimentos , tais como ELISA , imunoensaios , espectrometria de massa altamente sofisticadas e especializadas, e de imagem. Na maioria dos casos, a proteína é indirectamente detectada - por exemplo , utilizando um anticorpo que se liga a ele e , em seguida, utilizando um sistema de detecção secundária para visualizar. A técnica de base é que a detecção da proteína de transferência de Western , durante o qual uma proteína é executado através de um gel de agarose e depois transferidos para uma membrana . Em seguida, é " sondado " , permitindo que um anticorpo para se ligar a ele , e o anticorpo é , em seguida, feito reagir com uma solução química , tal como uma mancha de prata , para produzir uma imagem da localização da proteína no blot . Isto dá uma indicação do tamanho da proteína e se ele estiver presente como unidades múltiplas ou únicas . Outro método vulgarmente utilizado é a detecção fluorescente . A ligação de um anticorpo marcado com uma partícula fluorescente à proteína irá permitir que ele seja visualizado por microscopia .
O objetivo de analisar Protein Expression

Estudar a expressão de uma proteína dá um investigador uma indicação de que está a ser produzido ( ou seja , o seu padrão de expressão e localização ) ou suas quantidades ( isto é , o seu tecido ou níveis celulares ) . Esta informação é utilizada em diagnóstico em patologia , por exemplo , a detecção de proteínas na urina para determinar se um paciente tem doenças renais , tais como a doença renal tubular ou nefropatia diabética . Em laboratórios de genética experimentos de clonagem de genes normalmente geram recombinante proteínas ( geneticamente alterados ) . A análise dessas moléculas sintéticas é crucial na verificação sequências de genes ou a verificação de mutações que podem ou não ser desejáveis . Por exemplo , as vacinas são proteínas produzidas pelas unidades artificialmente modificadas de genes . Estas proteínas devem ser analisadas com cuidado para assegurar que os genes foram alterados na forma correcta e desejada , de modo a evitar colateral indesejado ou efeitos tóxicos .
Expressão de Proteínas A análise por Western Blotting

A análise de expressão de proteína de transferência de western utilizando um procedimento laboratorial de rotina muito realizada para que os cientistas para avaliar a clonagem do gene e a produção da proteína recombinante . Por exemplo , na biologia molecular e da engenharia genética , os genes de diferentes espécies ( tais como o rato e humano ) são unidas entre si e colocados em uma célula bacteriana , a qual é capaz de expressar a proteína . A fim de assegurar que a proteína correcta está a ser gerado , a sua expressão deve ser analisado por transferência Western . Western blot também é usado em patologia médica para diagnosticar a doença da vaca louca e HIV.
Protein Expression Análise por Citometria de Fluxo

citometria de fluxo requer células para ser marcadas com um anticorpo fluorescente , que se liga a uma proteína expressa sobre a superfície de , ou no interior , de uma célula . Ele é usado em pesquisa farmacêutica para encontrar moléculas (citocinas) que são exclusivos para um conjunto específico de células e envolvidas na sinalização celular e comunicação. Isso é importante para que o efeito das drogas sobre a fisiologia celular normal ea função pode ser monitorado durante o desenvolvimento de drogas e ensaios clínicos.