Ferramentas de genotipagem

pesquisadores genéticos têm esforços combinados para determinar toda a seqüência genética , 9 bilhões de bases , encontrados no genoma humano . O genoma é o conteúdo em ADN encontrado em todas as células humanas que consiste em repetir bases azotadas rotulados como " A", " L ", " C " e " T. " A pesquisa genética continua a olhar para a variação em diferentes genomas humanos, bem como as diferentes espécies para estudos evolutivos. Estudos genéticos médicos estão interessados em encontrar anormalidades genéticas ou variação genética que pode causar a doença. A genotipagem é um método para determinar a variação genética sem sequenciar um genoma inteiro . Pesquisadores isolar pequenas regiões do genoma para procurar diferenças de tamanho , o resultado de um número diferente de bases nitrogenadas . Número base diferente pode ser causada por uma anomalia genética que resulta em doenças tais como diabetes , doença de Alzheimer e cancro . As ferramentas utilizadas para executar aplicações de genotipagem têm evoluído e desenvolvido para determinar rapidamente e com precisão um genótipo individual. A Reação em Cadeia da Polimerase

A evolução da tecnologia genética proveniente de desenvolvimento da Reação em Cadeia da Polimerase , ou PCR. Este método permite aos pesquisadores para amplificar ou fazer cópias de pequenas regiões do genoma em poucas horas. A região de interesse é determinado pela adição de moléculas de DNA curtas --- primários que correspondem ao início e fim da região de interesse.

PCR tornou-se uma ferramenta valiosa na pesquisa genética. Amplificar a mesma região de indivíduos diferentes proporciona um método de comparação . Identificação forense utiliza atualmente 15 regiões separadas para comparação. Uma região pode igualar em pessoas diferentes. No entanto , duas pessoas não devem corresponder a todas as 15 regiões .
Agarose Gel Eletroforese

PCR é o método para amplificar regiões específicas de DNA. No entanto , ela não fornece um método para comparar o tamanho efectivo dos fragmentos . Os produtos de PCR são separados por tamanho utilizando um material semelhante a gel chamado " agarose . " Fragmentos menores migram mais rapidamente através de agarose em resposta a uma corrente eléctrica , num processo chamado " eletroforese em gel de agarose . "

Após PCR , os fragmentos são carregados sobre a agarose e migram ao longo do gel , quando uma corrente eléctrica é aplicada . O brometo de etídio permite fragmentos para ser visto quando está sob luz ultravioleta . Electroforese em gel de agarose fornece um método para a determinação rápida de PCR bem sucedido , bem como se aproxima do tamanho dos fragmentos . No entanto , a desvantagem de agarose, como uma ferramenta para a genotipagem é que os fragmentos devem ser substancialmente diferentes em tamanho para obter resultados precisos . Agarose não fornece um bom meio para a comparação de fragmentos de diferentes por uma única base.

Automated sequenciadores e Analisadores genéticos
fluorescente etiquetado fragmentos de DNA gravadas por um seqüenciador automático.

seqüenciadores automáticos e analisadores genéticos tornaram-se o principal instrumento utilizado pela genotipagem. Estes permitem que os fragmentos diferentes , por uma única base azotada , a ser determinada rapidamente e de forma barata . Tal como acontece com eletroforese em gel de agarose , os fragmentos de ADN são primeiro amplificado através de PCR . No entanto , um iniciador é marcado com um corante fluorescente adicionar cor ao fragmento . As amostras são separadas de acordo com o tamanho através de migrar através de um polímero do tipo gel , em resposta a uma corrente eléctrica . Fragmentos menores movem-se mais rapidamente do que fragmentos maiores . Como os fragmentos de migrar para o fim de o polímero , uma câmara digital registra a cor e envia a informação para um computador , para análise. Equipamentos de sequenciamento automatizado é usado atualmente em identificação forense e testes de paternidade .
Next Generation Sequencers também Determine Genótipos

instrumentos de sequenciamento de próxima geração surgiram rapidamente durante o desde 2006. Este combina a tecnologia de amplificação por PCR e sequenciação em conjunto a fim de determinar milhões de bases de uma só vez . O processo começa com a PCR ; no entanto , diferentes iniciadores são ligados a pérolas misturadas num tubo de reacção permitindo que milhares de regiões a amplificar de uma só vez . sequenciadores

de nova geração , em seguida, separar os fragmentos por tamanho e permitem uma multiplicidade de regiões de DNA a ser analisado . O método é desvantajoso como uma ferramenta de genotipagem em que os pesquisadores estão interessados em comparar uma única região do genoma . A vantagem é que o genoma do isolado a partir de uma única célula fornece material suficiente para a amplificação por PCR . Comparando-se os genótipos de células normais e anormais isolados de um único indivíduo pode ajudar a identificar as células cancerosas e tratamentos potenciais.