Como Usar Ácido Dinitrossalicílico: Preparo e Análise de Glicose

Ácido dinitrossalicílico (DNSA ou ácido 3:5-dinitrossalicílico) é um reagente usado para determinar teor de açúcar, especialmente glicose. A técnica DNS estima açúcar presente no sangue, líquido cefalorraquidiano e outros fluidos corporais. É eficaz no atendimento de requisitos de clínicas diabéticas em laboratórios hospitalares, pois apenas 10 minutos são suficientes para o processo e os reagentes são estáveis, baratos e de fácil preparo. A quantidade de glicose no sangue tem implicações metabólicas e determina presença de distúrbios relacionados como hiperglicemia. Uma boa forma de avaliar nível de glicose é através do ácido dinitrossalicílico.

Materiais Necessários

• Ácido 3:5 dinitrossalicílico (17,5 g)
• Água destilada quente 60°C (1000 ml)
• Papel de filtro
• Funil
• Solução padrão de glicose 1% em ácido benzoico saturado
• Recipiente com tampa (> 100 ml)
• Fenol (13,8 g)
• Bissulfito de sódio (13,8 g)
• Solução de hidróxido de sódio 10% (350 ml)
• Tartarato de potássio-sódio (510 ml)
• Água em temperatura ambiente (180 ml)
• Pipetas (0,1 ou 0,2 ml)
• Banho-maria fervente
• Equipamento de laboratório para aquecimento
• Equipamento para medir pequenos sólidos e líquidos

Instruções

1. Coloque 17,5 g de ácido 3:5-dinitrossalicílico em 1000 ml de água destilada quente (~60°C) e mexa para dissolver. Filtre através de papel de filtro e funil e armazene a 25°C. Isso é o Reagente A de Lee.
2. Prepare solução Glicose-DNSA adicionando solução de 1% glicose em ácido benzoico saturado a 100 ml de 1,75% do Reagente A de Lee e misture bem invertendo o recipiente tampado repetidamente. Armazene a 25°C.
3. Dissolva 13,8 g de fenol e 13,8 g de bissulfito de sódio em 350 ml de NaOH 10%. Adicione esta solução a 510 g de tartarato de potássio-sódio em 180 ml de água. Filtre a solução final através de papel de filtro. Armazene em temperatura ambiente. Isso servirá como Reagente B de Lee.
4. Obtenha sangue de punção capilar usando pipetas comuns de 0,1 ou 0,2 ml. A pipeta de 0,1 ml é qualitativamente mais precisa para medir 0,1 ml de sangue. O inverso é verdadeiro para 0,2 ml.
5. Entregue o sangue na pipeta na solução Glicose-DNSA em tubo de ensaio. Misture na proporção 1:20. Movimente a pipeta para cima e baixo até obter distribuição uniforme entre tubo e pipeta. Deixe a pipeta na solução e remova o precipitado após assentar por uma ou duas horas.
6. Adicione volume igual do Reagente B de Lee ao sobrenadante claro. Aqueça em banho-maria fervente por não menos que 3 minutos.
7. Compare a cor vermelha desenvolvida com a produzida por solução padrão de glicose.