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Descrição da Coloração de Gram e Diagnóstico Laboratorial da Tuberculose

Tuberculose é doença infecciosa causada por Mycobacterium tuberculosis. Doença respiratória caracterizada por formação de tuberculomas, necrose, abscessos, fibrose e calcificação nos pulmões. Pode infectar rins, linfonodos, ossos, articulações e pele.

Diagnóstico laboratorial primário envolve coloração para visualizar bactérias ao microscópio. Espécime de escolha: escarro ou lavado broncoalveolar (infecção respiratória) ou amostra de tecido.

Fisiologia

M. tuberculosis é bastonete (bacilo), não móvel, não esporulado, aeróbio estrito. Mede 0,4×3 µm. Divisão binária a cada 15–24 h (lento vs. outras bactérias). Por isso, pode levar até 9 semanas para aparecer em meio de cultura.

Sensível a luz UV e calor (ex.: pasteurização); resistente a desinfetantes químicos.

Coloração de Gram

M. tuberculosis não pode ser classificada verdadeiramente como Gram-positiva ou Gram-negativa. Classificação de Gram baseia-se na quantidade de peptidoglicano na parede celular. Gram-positiva: camada espessa (~90%); Gram-negativa: camada fina (5–20%). Corantes penetram e ligam-se a componentes da parede. Bactérias coradas aparecem roxas ou rosadas.

Em M. tuberculosis, parede celular tem peptidoglicano e lipídios complexos, que impedem penetração do corante de Gram. Parede também resiste à descoloração por ácido/álcool → bactérias chamadas "ácido-alcoolo-resistentes" (BAAR). Lipídios: ácido micólico, fator corda, cera-D. Se coradas pelo Gram, aparecem fracamente Gram-positivas ou pálidas, com pouca cor.

Para visualizar, usam-se colorações especiais: auramina-rodamina ou Ziehl-Neelsen.

Coloração Auramina-Rodamina

Usa corante fluorescente amarelo para visualizar M. tuberculosis em microscópio de fluorescência. Permanganato de potássio ou laranja de acridina como contra-corante. Bacilos aparecem verdes.

Mais sensível que Ziehl-Neelsen e mais custo-efetiva.

Coloração de Ziehl-Neelsen

Originada de Franz Ziehl e Friedrich Neelsen. Usa fucsina carbólica aquecida, álcool-ácido de alta concentração, contra-corante (verde malaquita ou azul de metileno). Em microscópio de fluorescência, bacilos aparecem rosa brilhante.

Padrão-ouro para identificação primária de M. tuberculosis e M. leprae.

Meio de Cultura (Ágar)

Secundário à microscopia, M. tuberculosis deve crescer em ágar especial. Lowenstein-Jensen: substâncias orgânicas complexas (ovo, batata), sais, glicerol, verde malaquita (inibidor). Antibióticos podem ser adicionados para inibir contaminantes. Espécime semeado; bactérias crescem em 3–9 semanas.

Solução de cultura com nutrientes (albumina, biotina) suporta crescimento de quantidades mínimas → Middlebrook 7H9 (ou 7H12).

Colônias: pequenas, lisas, marrom-claro em ambos.

Com tecnologia avançada, pode-se usar leitor automatizado: solução líquida Middlebrook 7H9 + indicador fluorescente monitora crescimento e reporta positivo/negativo.