Biotinilação Protocolos

biotinilação é o processo de ligação de biotina , ou vitamina H , com uma proteína ou outras moléculas . Este procedimento científico é usado principalmente na área de biotecnologia e pesquisa de biologia molecular envolvendo DNA, proteínas e antígenos , que são moléculas do sistema imunológico do corpo reconhece como invasores. Protocolos de biotinilação incluem a biotinilação de anticorpos e péptidos , bem como a biotinilação da superfície celular . Biotinilação de anticorpos

Para ligar a biotina aos anticorpos produzir proteínas quando um antígeno entra no corpo , os técnicos utilizam bicarbonato de sódio ( NaHC03 ) a pH 9 ; dimetil sulfóxido ( DMSO ) ;

NHS - Biotina e uma substância salina chamado PBS . As amostras são misturadas com o bicarbonato de sódio , o qual é posteriormente adicionado ao NHS - biotina em DMSO . A solução é , em seguida, adicionou -se aos anticorpos analisados e incubou-se em um equipamento de chamada de um rotador durante quatro horas à temperatura ambiente ou durante a noite a 39,2 graus centígrados . Finalmente , a solução é diluída com PBS .
Superfície celular Biotinilação

No protocolo a biotinilação da superfície celular , os técnicos utilizam cultura de tecidos , soro fisiológico tamponado com fosfato ( PBS) a pH 7,4 e sulfossuccinimidil - 2 - etil- 1 ,3 - solução tampão ditiopropionato ( biotinamido ) para equilibrar a acidez contendo grupos amino e TrisCl , de acordo com a Current Protocols in Protein Science.The células são misturadas com a biotina e solução tampão , decantados e centrifugados . Teor de sólidos e proteínas específicas são posteriormente analisadas em uma placa de eletroforese em gel .
Biotinilação de Peptídeos

Para realizar a biotinilação de peptídeos , o reagente utilizado é NHS SS - biotina , de acordo com Philip Shepherd em " Anticorpos monoclonais : Uma Abordagem Prática ". Os péptidos são fragmentos curtos de aminoácidos, as moléculas que formam as proteínas e ADN . Neste protocolo , a solução comercial de NHS - SS A biotina é dissolvido em água . Em seguida, a amostra de péptido é adicionada a ele, juntamente com bicarbonato de sódio para equilibrar a acidez ou pH . A solução é , em seguida, incubadas em gelo durante duas horas. Os técnicos podem observar a amostra com ou sem as moléculas de biotina .