Protocolos de biotinilação

Biotinilação é o processo de ligar biotina, ou vitamina H, a uma proteína ou outras moléculas. Este procedimento científico é usado principalmente em biotecnologia e pesquisa de biologia molecular envolvendo DNA, proteínas e antígenos, que são moléculas que o sistema imunológico do corpo reconhece como invasores. Protocolos de biotinilação incluem a biotinilação de anticorpos e peptídeos, bem como biotinilação de superfície celular.

Biotinilação de Anticorpos

Para ligar biotina a proteínas de anticorpos produzidas quando um antígeno entra no corpo, técnicos usam bicarbonato de sódio (NaHCO₃) a pH 9; dimetil sulfóxido (DMSO); NHS-Biotina e uma solução salina chamada PBS. Amostras são misturadas com bicarbonato de sódio, que é posteriormente adicionado à NHS-Biotina em DMSO. A solução é então adicionada aos anticorpos analisados e incubada em um equipamento chamado rotador por quatro horas em temperatura ambiente ou durante a noite a 4 graus Celsius. Finalmente, a solução é diluída com PBS.

Biotinilação de Superfície Celular

No protocolo de biotinilação de superfície celular, técnicos usam cultura de tecido, salina fosfatada tamponada (PBS) a pH 7,4 e solução tampão de sulfossuccinimidil-2-(biotinamido)etil-1,3-ditiopropionato para balancear acidez contendo grupos amino e TrisCl, segundo Current Protocols in Protein Science. As células são misturadas com biotina e solução tampão, decantadas e centrifugadas. Conteúdos sólidos e proteínas específicas são posteriormente analisados em uma placa de eletroforese em gel.

Biotinilação de Peptídeos

Para realizar a biotinilação de peptídeos, o reagente usado é NHS-SS Biotina, segundo Philip Shepherd em "Monoclonal Antibodies: A Practical Approach". Peptídeos são fragmentos curtos de aminoácidos, as moléculas que formam proteínas e DNA. Neste protocolo, a solução comercial NHS-SS Biotina é dissolvida em água. Então a amostra de peptídeo é adicionada a ela, junto com bicarbonato de sódio para balancear acidez ou pH. A solução é então incubada em gelo por duas horas. Técnicos podem observar a amostra com ou sem as moléculas de biotina.