Western Blot Métodos de Detecção

Como o número de casos de HIV e AIDS em todo o mundo aumentou , a necessidade de testes precisos HIV tornou-se essencial. Agora, depois de testes de ELISA HIV positivo , os profissionais médicos usam um teste de Western Blot para confirmar uma infecção de HIV positivo . Médicos diagnosticam a doença de Lyme , através de testes de Western blot também. O teste utiliza métodos de detecção intrincados : trabalhadores médicos devem transferir as amostras de sangue a partir de um gel para uma membrana, para facilitar o processo de detecção . Para identificar anticorpos realmente na membrana , os trabalhadores usam enzimas específicos , substratos e /ou flurophores . AP Enzima

fosfatase alcalina ( AP ), constitui uma das principais enzimas no teste de Western blot . AP tem um tempo de reação linear , o que lhe dá uma vantagem sobre outras enzimas detecção . Quanto mais tempo uma reacção AP tem que ocorrer , o mais preciso é o teste . No entanto, o período mais longo pode pegar outros compostos químicos e " fundo " ruído , o que pode distorcer os resultados do teste.

HRP enzimáticos

Trabalhadores médicos consideram rábano peroxidase ( HRP) superior à AP, devido ao tamanho do HRP menor, alta taxa de atividade , a compatibilidade com a membrana reação , confiabilidade, preço barato e ampla disponibilidade .

Cromogênicos Substratos

profissionais médicos consideram substratos cromogênicos melhor para ver a reação da membrana interna do sangue e da enzima. Substratos cromogênicos não são tão sensíveis como outros substratos e tendem a desaparecer à medida que a mancha seque. Mas, para uma confirmação teste visual rápida , substratos cromogênicos fazer uma escolha eficaz. Substratos blotting
quimioluminescentes Blotting Substratos

quimioluminescentes exigem uma reação constante para um teste bem-sucedido. Se a enzima cesse a sua actividade ou o substrato estiver descarregada, o resultado de teste torna-se perdido. No entanto , num ensaio ideal , o resultado de teste torna-se disponível em uma a 24 horas. Trabalhadores médicos usam equipamentos de imagem digital ou raios-X para realmente ver o resultado do teste , porque o olho nu não é possível detectá-lo.
Flurophores

Se os trabalhadores médicos não testam com enzimas e seus substratos , em seguida, eles utilizam anticorpos flurophore conjugado . O teste flurophore requer menos passos , mas precisa de equipamento especial. O teste requer uma fonte de luz de excitação , o qual faz com que a reacção adequada na membrana . Flurophores e equipamento de iluminação são caros, mas os trabalhadores médicos têm o benefício de usar vários flurophores no mesmo experimento .