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Análise Laboratorial de Coliformes Totais em Água Potável

Coliformes como Indicadores de Qualidade

Bactérias coliformes (grupo de bacilos Gram-negativos, facultativamente anaeróbios, fermentadores de lactose) habitam o trato intestinal de animais homeotérmicos. Sua presença em água indica contaminação fecal recente e risco de patógenos entéricos (Salmonella, Shigella, V. cholerae, E. coli O157:H7, vírus, protozoários). E. coli (termotolerante) confirma contaminação fecal recente.

Quatro Métodos Padrão APHA/AWWA/USEPA (Standard Methods 9221/9222/9223)

1. Teste Presença-Ausência (P-A) — SM 9221 D

• Princípio: Inoculação de 100 mL em caldo de lactose/lauril sulfato + indicador (fermentação → gás/ácido → turbidez/coloração).
• Vantagens: Sensível (detecta 1 UFC/100 mL), rápido (24-48h), barato, simples.
• Limitações: Qualitativo apenas (não enumera). Falsos-positivos por aeromonas, outras bactérias fermentadoras. Não distingue coliformes totais de fecais sem etapa confirmatória.

2. Filtração em Membrana (MF) — SM 9222 B/C

• Princípio: Filtrar 100 mL (ou volume ajustado) em membrana 0,45 μm → transferir para meio seletivo (m-Endo, m-FC, m-TEC) → incubar → contar colônias típicas.
• Vantagens: Quantitativo (UFC/100 mL), permite contagem de coliformes totais, fecais (E. coli) e enterococos. Rápido (22-24h).
• Limitações: Águas turvas (sólidos suspensos entopem membrana, inibem crescimento). Não detecta bactérias viáveis mas não cultiváveis (VBNC) ou inibidas por cloro residual (necessita neutralizador: tiossulfato de sódio).

3. Fermentação em Tubos Múltiplos (MPN) — SM 9221 B/E

• Princípio: Série de diluições em tubos com caldo seletivo (lauril sulfato, bile brilhante verde, EC-MUG) → padrão de positividade → Tabela de MPN (Número Mais Provável).
• Vantagens: Funciona em águas turvas. Referência legal histórica.
• Limitações: Apenas estimativa estatística (intervalo de confiança amplo). Trabalhoso, demorado (48-72h), maior volume de reagentes/vidraria. Menos preciso que MF.

4. Método Enzimático Definido (Colilert®/Quanti-Tray®) — SM 9223 B

• Princípio: Substratos cromogênicos/fluorogênicos (ONPG → coliformes totais = amarelo; MUG → E. coli = fluorescência azul 365 nm). Quantificação por Quanti-Tray (poços de volumes definidos → MPN exato).
• Vantagens: Específico, sensível, quantitativo (MPN/100 mL), resultados em 18-24h, sem confirmação secundária, automação possível.
• Limitações: Custo por teste mais alto. Interferência por alta turbidez/cor. Requer equipamento (seladora Quanti-Tray, luminância UV).

Padrões Regulatórios (Brasil / EUA / OMS)

Parâmetro	Brasil (Portaria GM/MS 888/2021)	EUA (EPA NPDWR)	OMS (DWQ 2017)
Coliformes totais	Ausente em 100 mL	Ausente em 100 mL (MCLG=0; MCL=5% amostras positivas/mês)	Ausente em 100 mL
E. coli / Coliformes fecais	Ausente em 100 mL	Ausente em 100 mL	Ausente em 100 mL
Água de recreação (mar/doce)	CONAMA 274/2000: < 1000 NMP/100 mL (coliformes fecais)	EPA BEACH Act: < 126 UFC/100 mL (Enterococcus), < 235 UFC/100 mL (E. coli)	OMS: < 100 UFC/100 mL (E. coli)

Boas Práticas Laboratoriais

• Coleta em frasco estéril com tiossulfato de sódio (neutraliza cloro).
• Iniciar análise ≤ 6h (refrigerado 4-10°C) ou ≤ 24h (ideal ≤ 8h).
• Controles de qualidade: cepas de referência (E. coli ATCC 25922, Klebsiella ATCC 13883), blanks, duplicatas.
• Ensaio de proficiência (PT) obrigatório (INMETRO/ISO 17025).