Como Corar Esfregaço de Staphylococcus para Microscopia de Luz

Staphylococcus (Gram-positivo) comensal na pele; algumas espécies patogênicas (ex.: S. aureus). Coloração de Gram confirma morfologia (cocos em cachos) e classificação.

Materiais

• Lâmina com esfregaço de Staphylococcus
• Pinça para lâmina
• Bico de Bunsen
• Luvas
• Suporte de coloração
• Corante (violeta de gentiana, lugol, álcool-acetona, safranina — kit Gram)
• Suporte de secagem lateral
• Água destilada em frasco lavador
• Papel absorvente (bibuloso)

Procedimento (Coloração de Gram)

1. Fixação pelo calor: segure lâmina com pinça; passe base na chama do Bunsen (1 seg, vai-e-vem). Ou: estufa a 60 °C por 10 min. Fixa bactérias à lâmina.
2. Resfriamento completo: evita ruptura/desmorfologia por superaquecimento.
3. Verificação: microscopia de luz para confirmar integridade; repetir se necessário.
4. EPI: luvas (corantes mancham pele).
5. Montagem: lâmina no suporte sobre pia; fixe com pinça/prendedor.
6. Corante primário (Violeta de gentiana): cubra esfregaço; 1 min. Escorra excesso.
7. Mordente (Lugol/Iodo): cubra; 1 min. Forma complexo corante-iodo nas Gram-positivas. Escorra.
8. Descolorante (Álcool-acetona): escorra sobre lâmina até sair incolor (segundos). Crítico: tempo excessivo descolore Gram-positivas.
9. Contrasting (Safranina): cubra; 30–60 seg. Escorra.
10. Lavagem: incline lâmina; água corrente suave de cima para baixo.
11. Secagem: papel absorvente (toque leve, não esfregar).
12. Microscopia: imersão (1000×); Staphylococcus = cocos roxos (Gram+) em cachos irregulares.