Como Graduir Reações Anticorpo-Antígeno (Teste de Coombs)

Reações antígeno-anticorpo detectam aglutinação (aglomerados visíveis) quando soro do paciente é misturado a reagentes. A graduação da reação padroniza a interpretação em banco de sangue e emergências. O teste também é conhecido como prova de Coombs.

Materiais Necessários

• Sangue total em tubo
• Pipeta de transferência
• Visualizador de aglutinação iluminado
• Frasco de solução salina
• Tubos de centrífuga
• Centrífuga
• Anticorpo (reagente)

Procedimento

1. Coleta de amostra de sangue fresco com técnica asséptica.
2. Lavagem de hemácias para obter suspensão a 3%.
3. Transfira 1–3 gotas da suspensão para tubo de centrífuga autoclavado.
4. Adicione salina até ¾ do volume, jateando no centro do tubo.
5. Tampe e centrifugue para formar botão celular no fundo.
6. Descarte o sobrenadante com pipeta, sem perturbar o botão. Repita lavagens se necessário.
7. Adicione o anticorpo reagente ou amostra teste.
8. Posicione o tubo no visualizador iluminado para observar o fundo.
9. Agite suavemente para ressuspender as células e observe a aglutinação.
10. Gradue conforme escala padrão:
    • 4+: aglomerado sólido único
    • 3+: vários aglomerados grandes
    • 2+: aglomerados pequenos a médios, fundo claro
    • 1+: aglomerados pequenos, fundo turvo
    • +w: microaglomerados apenas, fundo turvo
    • + micro: aglutinação apenas ao microscópio
    • MF (mixed field): aglomerados mistos a células não aglutinadas
    • Hem/hem: hemólise (positivo); neg: negativo